[发明专利]一种具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药复方，具体涉及具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱及其应用，属于医药制药领域。

背景技术

四逆汤源于张仲景的《伤寒论》，为回阳救逆之代表方，由附子、干姜、炙甘草组成。创方以来近两千年间，历代医家以传统煎煮的方式用于临床，疗效显著。现代药理研究表明其具有抗休克、抗动脉粥样硬化、增加血流量等作用。方中君药附子主要含有生物碱类、多糖类成分，臣药干姜中含有大量挥发油、萜类、多糖等成分，佐药甘草中含有皂苷、黄酮类及多糖类成分。目前临床仍以汤剂加减为主、市售各类制剂也均已水提物等粗制剂作为原料进行纯化加工，有效成分含量低、服用量也大、且存在大量未知成分而产生毒副作用或用药禁忌。

目前，对于四逆汤的现代药理活性研究多集中在总提取物及其方中单味中药的单体或纯化物等，还没有对水提物中包括总生物碱在内的各类化学成分的纯化组分进行药理、临床应用等相关研究和报道。

方中三味中药均有大量的成分、药理作用及临床应用研究和报道，但方剂配伍应用一定存在提取物质的“质”和“量”的变化，这些变化极有可能是药效的关键性物质。如何来分离总提取物？如何来阐述不同组分的量效关系、组分间的相互作用及不同配比组合应用，来达到更好的应用和开发价值，这些都是亟待解决的问题。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，对经典方剂四逆汤进行系统的化学成分筛选和分离，提供一种药理活性强的具有很好心肌细胞保护功效的精制生物碱，本发明另一个目的是提供该精制生物碱的新的临床用途。

技术方案：为了实现以上目的，本发明所采取的技术方案为：

一种具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱，它通过以下方法制备得到：

（1）取重量比为3:2:3的附子，干姜和炙甘草，加入总药材6至12倍量的水煎煮提取1至3次，合并煎煮液，浓缩，加入乙醇，放置沉淀，离心，得上清液；

（2）取步骤（1）中上清液，减压回收乙醇，加水分散后上大孔吸附树脂柱，先用水冲洗，然后依次用浓度为10～95%的乙醇进行梯度洗脱，检识洗脱液中生物碱，合并生物碱检识阳性的洗脱液；

（3）取步骤（2）中含生物碱的洗脱液，减压回收乙醇后，加水后调pH值为1～2，上阳离子交换树脂柱分离，用碱性乙醇洗脱树脂，收集碱性乙醇洗脱液，取阳离子交换树脂，用碱性乙醇回流提取，得提取液与碱性乙醇洗脱液合并，减压回收乙醇，得四逆汤精制总生物碱。

作为优选方案，以上所述的具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱，其中步骤（1）中煎煮提取1至3次，每次2～3小时，合并煎煮液，浓缩至密度为1.1～1.2g/mL，加入乙醇，使乙醇浓度为50～80%，静置沉淀12～24小时。

作为优选方案，以上所述的具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱，步骤（2）中大孔吸附树脂柱为DM-301型或HPD-100型大孔吸附树脂，大孔吸附树脂脂用量为原药材用重量的1～2倍。

作为优选方案，以上所述的具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱，步骤（2）中合并浓度为30%和浓度为95%的乙醇洗脱液作为生物碱洗脱部位。实验结果表明，经过显示鉴定（碘化铋钾和碘化汞钾），表明浓度为30%和浓度为95%的乙醇能很好的将生物碱从大孔树脂柱上洗脱下来，生物碱有效成分含量高，并且杂质少，因此，本发明优选浓度为30%和浓度为95%的乙醇洗脱液作为生物碱最佳的洗脱部位。

作为优选方案，以上所述的具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱，步骤（3）中阳离子交换树脂用量为原药材重量的1～2倍；所述的碱性乙醇为浓氨水调乙醇至pH值为11至12，碱性乙醇的用量为原药材重量的1～2倍。

作为优选方案，以上所述的具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱，步骤（3）中用碱性乙醇回流提取2～3次，每次2～3小时，每次用量为原药材重量的1～3倍。

作为优选方案，以上所述的具有防治心脏病功效的四逆汤精制总生物碱，步骤（2）中过大孔吸附树脂柱时，水洗脱液为原药材用重量的1～3倍；浓度为10%-95%不同乙醇洗脱液体积为原药材用重量的1～3倍。

四逆汤中，附子，干姜和炙甘草含有大量的化学成分，如多糖类，挥发油、萜类、皂苷类、黄酮类，生物碱类等成分，提纯方法难度较大。本发明结合现代分离手段，采用大孔树脂与离子交换树脂联用的方法，经过系统化学成分筛选，筛选出生物碱富集，精制提纯的最佳工艺，并结合药理实验筛选，制备得到具有保护心肌细胞，治疗心脏病功效的精制生物碱。