[发明专利]一种铜绿假单胞菌株发酵液提取物与井冈霉素复配物的应用

说明书

本申请是申请号为201310250195.0、申请日为2013年6月21日，发明名称为一种铜绿假单胞菌株的分案申请。 

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，特别涉及拮抗菌-铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）SU8，同时还涉及该菌株的应用。 

背景技术

在农业生产上，常使用化学农药防治作物病害的发生。尽管化学农药对作物病害有理想的防治效果，但由化学农药带来的负面问题日益突出，譬如:污染环境、破坏天敌，长期使用也易诱发病原菌产生抗药性。其次，过量的施用化学农药不仅增加了用药成本，也会导致农药残留。依靠现代生物防治技术，采用拮抗菌防治作物病害的发生起着非常重要的作用，特别是利用拮抗菌产生的活性物质防治作物病害，具有安全、高效、低毒、无污染、周期短、易于研究、便于生产、无残留等优点。 

早期的研究结果表明：假单胞菌作为一种拮抗菌具有较大的开发潜力。铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）又是假单胞菌的一种，可产生吩嗪-1-羧酸、藤黄绿脓菌素、2，4-二乙酰藤黄酚等多种活性物质，对水稻纹枯病、稻瘟病、烟草黑胫病、油菜菌核病、杂交竹梢枯病等多种植物病原菌具有抑制作用。由于该菌可产生多种抑菌物质，不同菌株产生的抑菌物质不一样，同一菌株也可产生多种抑菌物质，而且这些抑菌物质对植物病原真菌具有抑制作用，但其提取物与井冈霉素的复配物对植物病原真菌抑制作用鲜见研究，而且对植物病原细菌的研究较少，仅见其代谢产物绿脓菌素对细菌具有抑制作用，其他代谢产物对植物病原细菌的研究也未见报道。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种铜绿假单胞菌SU8（Pseudomonas aeruginosa）SU8。 

本发明所述的铜绿假单胞菌SU8（Pseudomonas aeruginosa）SU8，已于2013年5月7日保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉.武汉大学），保藏编号为CCTCC NO：M2013178。 

本发明菌株SU8的特性： 

1.形态特征 

在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，在温度28-30℃连续培养30h，通过电显微镜扫描观察，菌株SU8呈长杆状，菌体长短均匀，一般长度在1-1.5μm范围内，有时成对或短链状排列，见图1。革兰氏染色后的菌体呈红色，指示该菌株为革兰氏阴性菌。 

2.在各种培养基上生长（温度28-30℃，培养30h）的特征 

马铃薯葡萄糖培养基：菌落呈山脉状、湿润、表面粗糙边缘光滑、呈淡黄色无金属光泽、长时间培养产生墨绿色积淀物、紫外灯下有荧光。可溶性色素有。 

牛肉膏蛋白胨培养基：菌落呈圆形、湿润、表面粗糙有小点状突起、早期呈黄绿色、后期呈红褐色、紫外灯下无荧光。可溶性色素有。 

高氏一号培养基：菌落呈圆形、湿润、表面与边缘均光滑、无色透明状。可溶性色素无。 

King氏培养基：菌落呈山脉状、湿润、表面粗糙有小点状突起、边缘光滑、有铜绿色金属光泽，紫外灯下有荧光。可溶性色素有。 

3.生理化特征 

能利用D-木糖、D-葡萄糖、甘露糖、赤藓糖、阿糖醇、松三糖、甘油、柠檬酸盐、甲基红，可使明胶液化、脂肪分解、硝酸盐还原、氧化酶阳性、脓青素阳性、接触酶阳性、过氧化氢酶阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性，但不能利用乳糖、 L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、肌醇、半乳糖、D果糖、蔗糖、棉籽糖、石蕊牛乳、糊精、麦芽糖、山梨酸糖、水杨苷、七叶灵、不产生硫化氢、氨气、吲哚等，属于好氧菌，能在41℃下生长但不能再4℃下生长。 

参照文献《常见细菌系统鉴定手册》，结合本菌株SU8在各种培养基上的培养性状和生理生化特征，显示该菌株符合铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）的相关鉴定特征。将菌株SU816S rDNA的PCR扩增产物进行测序，序列经BLAST比对显示，与铜绿假单胞菌菌株P.aeruginosa SRDchr3(EU714901)序列的同源性达到99%。通过系统进化树构建，显示本菌株SU8与铜绿假单胞模式菌株P.aeruginosa ATCC10145聚在同一系统进化分支（见图2），同源性达到99%。结合本菌株SU8序列分析、形态特征、培养特征、生理化特征，与《常见细菌系统鉴定手册》判断该菌株属于铜绿假单胞菌属（P.aeruginosa），并命名为铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）SU8。