[发明专利]一种从苜蓿中提取高纯度生物碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从植物中提取生物碱的方法，具体为从苜蓿中高效分离提取高纯度生物碱的方法。

背景技术

苜蓿(Medicago sativaLinn.)为豆科(Legu-minosae)蝶形花亚科(Faboideae)苜蓿属植物，因其产草量高、富含蛋白质、适口性好、适应性强等特点而被称为牧草之王。苜蓿在我国已有2000多年的栽培历史，主要分布在东北、华北、西北地区，具有广泛的生态适应性和稳定的生产力，同时在抗旱、抗风沙、改良土壤、防止水土流失、保护生态环境等方面也起到积极的作用。苜蓿含有大量生物碱等多种次生代谢产物，在抗血栓、镇痛、消炎、抗氧化、抗菌、抗虫、化感等方面具有广泛的生物活性。然而目前没有从苜蓿中分离提取生物碱的相关研究。

生物碱(Alkaloids)一般指存在于生物体内的碱性含氮化合物，多数具有复杂的含氮杂环，有光学活性和显著的生理效应。主要分布在毛茛科、罂粟科、防己科、茄科、夹竹桃科、芸香科、豆科、小檗科等植物中。生物碱是从生物体内的氨基酸途径得到的目前已发现生物碱约6000种，并且仍以每年约100种的速度递增。多数生物碱具有显著的生理活性，如黄连中的小聚碱(黄连素)具有抗菌消炎作用；罗芙木中的利血平具有降压作用；长春花中的长春新碱具有抗癌活性；婴粟中的吗啡具有镇痛作用；延胡索中的去氢紫碱具有抗血栓的作用；包公中的包公藤甲素具有缩小瞳孔、降低眼压的作用，可用以治疗青光眼；海洋生物海绵中的抗体生物碱具有抗菌的作用。

由于生物碱本身有不稳定性，提取难度大，现有方法有的提取纯度过低、有的则提取成本过高、不适合大规模生产，如中国专利101653470中所记载的提取方法只能提取到纯度为50%的生物碱。随着市场上对生物碱需求不断增长，如何快速地从原料中得到质量稳定、纯度高、收率高、安全可靠的生物碱的提取方法研究很有必要，本发明将多种提取方法进行了集成改良，能够快速提取出提取率高、提取成本低、纯度大的苜蓿生物碱。

发明内容

本发明针对现有生物碱制备技术的不足之处，为此本发明进行了大量研究实验，提出一种从苜蓿中快速便捷高收率的提取高纯度生物碱的制备方法。

一种从苜蓿中提取高纯度生物碱的方法，包括如下步骤：

⑴将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨；

⑵用正丁醇回流提取，减压浓缩得粗浓缩液；

⑶粗浓缩液采用盐酸酸化，再用丙酮作为萃取剂萃取得到酸性水相；

⑷酸性水相经碳酸钠碱化后用氯仿萃取，得萃取相；

⑸所得萃取相用大孔吸附树脂柱进行吸附，采用水和乙醇洗脱后浓缩。

本发明以处在成熟期的无污染的苜蓿为原材料，根和叶片重量达全株的80%以上，苜蓿的根部及叶片含有大量的生物碱，原料研磨后要经60目筛子过筛去杂，有利于高纯度生物碱的提取。该方法除可用苜蓿作为原料外，还可广泛应用于金银花、杜仲叶等其他中草药原料提取生物碱。

进一步地，所述正丁醇的剂量是所述经研磨的苜蓿体积的8倍。

经实验表明可以作为有机提取剂的有正丁醇、异丙醇、石油醚或乙醚等，其中用正丁醇作为有机提取剂的提取干膏量最高，相关数据见表1。

进一步地，所述减压浓缩在温度40℃、真空度0.06-0.1MPa下进行。

进一步地，所述粗浓缩液经盐酸酸化至pH2～5；所述丙酮的用量是所述粗浓缩液体积的8倍。

经实验表明可以作为酸化剂的有盐酸、硝酸、磷酸或醋酸醚等，其中用4%盐酸作为酸化剂的提取率最高，相关数据是见表2。

经实验表明步骤⑶可以作为萃取剂的有丙酮、乙酸乙酯、石油醚或乙醚等，其中用丙酮作为萃取剂的萃取率最高，相关数据见表3。

进一步地，所述酸性水相经碳酸钠碱化至pH8～10。

经实验表明可以作为碱化剂的有碳酸钠、醋酸钠、硫酸钠或硝酸钠等，其中用碳酸钠作为碱化剂的提取率最高，相关数据见表4。

进一步地，所述氯仿的用量是所述酸性水相体积的8倍。

经实验表明步骤⑷可以作为有机萃取剂的有氯仿、丙酮、石油醚或乙醚等，其中用氯仿作为此步有机萃取剂的萃取率最高，相关数据见表5。

进一步地，所述大孔吸附树脂柱选自WLD-III（购自四川中药研究所）、DA201（购自天津农药厂）或D101（购自天津农药厂）。

大孔吸附树脂柱WLD-III型极性好，能大量吸附生物碱，进一步提高生物碱的提取率，经实验表明使用WLD-III的提取率最高，相关数据见图1。