[发明专利]一种消除乳糜干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅰ检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属医学检验技术领域，涉及一种消除乳糜干扰的胶乳免疫比浊法的血清胃蛋白酶原Ⅰ检测试剂盒。

背景技术

胃蛋白酶原(Pepsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，是胃粘膜分泌的一种门冬氨酸蛋白酶前体，是分子量42000Da的单链多肽，在胃内转变为具有活性的胃蛋白酶。

根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布，胃蛋白酶原可分成胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）两个亚群：其中1～5组分免疫原性近似，称为PGⅠ(PGA)，主要由胃底腺的主细胞和颈粘液细胞分泌；6～7组分被称为PGⅡ(PGC)，除由上述两种细胞分泌外，幽门腺的黏液细胞、贲门腺以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGⅡ，胃粘膜合成的PGⅡ约为总量的25％。

正常情况下，胃粘膜产生的胃蛋白酶原大部分进入胃腔，遇酸后肽链分解活化为胃蛋白酶，发挥其消化蛋白质的作用；小部分胃蛋白酶原则透过胃粘膜毛细血管进入血循环。血清胃蛋白酶原浓度可反映胃粘膜的分泌水平，不同胃蛋白酶原浓度水平也可反映不同部位胃粘膜的功能和形态变化。

胃蛋白酶原的检测已列入日本老年保健法，应用该项目进行大面积的人群普查使得日本胃癌的早诊率提高到90%，在日韩被称为胃底腺粘膜的“血清学活检”。

目前检测血清胃蛋白酶原含量的方法主要有酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、化学发光法和胶乳免疫比浊法等。

ELISA方法精确、定量，具有很高的敏感性，但操作程序繁琐，耗时长，不能适应大规模体检筛查或急诊的需要；RIA方法灵敏度高，特异性强，但放射免疫反应是竞争性的反应，测得的值是相对量而非绝对量，且存在辐射和放射性污染；化学发光法精确度高，检测速度快，但成本高昂，对配套设施要求高，无法应用于广大中、基层的医院和医疗卫生机构；胶乳免疫比浊法具有操作简便快速、自动化、定量准确、敏感度高等优点，可满足门、急诊和大规模体检筛查等需要。

现有胶乳免疫比浊试剂，由于其检测原理是测定反应形成的免疫复合物的浊度，因此极易受到乳糜干扰的影响。目前应对这个问题的方法，主要是使用专门的乳糜消除剂对样本进行预处理。而在大规模的人群普查、健康体检筛查和临床病人检验时，经常会遇到大量的乳糜、溶血等浑浊样本，此时通过购置样本处理剂，对这些样本进行单独处理，将会极大地增加操作人员的工作量，提高运营成本，也为临床检验的组织安排带来难题。

因此，研制一种能够消除乳糜干扰的胶乳免疫比浊法的胃蛋白酶原Ⅰ检测试剂盒，显得十分必要。

发明内容

本发明为了克服上述现有技术缺陷，提供了一种检测人体血清中胃蛋白酶原Ⅰ含量的试剂盒，不需要再对乳糜样本进行单独处理，节约了人力、资源，使用简单、快速，灵敏度高，不仅能够适应大规模人群普查的需求，也能满足日常临床快速、高通量检查的要求，适合产业化，便于临床推广。本发明采取的技术方案是一种胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅰ检测试剂盒，其组成包括：

试剂1，是一种为试剂盒提供适当反应环境、消除乳糜干扰、使抗原保持天然构象、并控制反应达到终点的时间和速率的试剂，包含电解质、乳糜消除剂、促凝剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液；

试剂2，是一种含有抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体包被胶乳颗粒的均一的乳白色液体，包含抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体包被胶乳颗粒、防腐剂及缓冲液；

校准品，是添加不同浓度胃蛋白酶原Ⅰ抗原的人血清基质缓冲液，用来与样本比较进行结果计算，包含电解质、防腐剂、稳定剂、胃蛋白酶原Ⅰ抗原、人血清及缓冲液。

所述电解质选自无机盐，优选氯化钠、氯化钾、氯化镁或硫酸镁。

所述乳糜消除剂，选自脂肪酶或1～5%的聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁试剂。

所述促凝剂选自PEG-4000、PEG-6000、PEG-8000、硫酸葡聚糖钠。

所述稳定剂选自牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、鱼皮明胶蛋白(Fish skingelatin)、山梨醇、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)。

所述表面活性剂选自吐温系列、脂肪醇聚乙二醇醚、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯月桂醚系列。

所述防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、Proclin系列。

所述缓冲液选自Tris-HCl缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPES-NaOH缓冲液、MOPSO缓冲液。