[发明专利]一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物病原细菌检疫、食品和环境微生物检测方法，尤其涉及一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法。 

背景技术

以目前植物病原细菌检疫工作为例。植物病原细菌的检疫工作有三个步骤：1、样品的症状观察；2、植物病原细菌的分离；3、病原菌鉴定。其中，第二个步骤即病菌的分离是工作的重点和难点，是植物病原细菌检疫工作的关键。只有拿到分离纯化的病原菌，这样才能进行之后的鉴定工作。目前对植物病原细菌样品进行初筛通常采取一些分子检测方法（如常规PCR、荧光PCR、ELISA、基因芯片、液相芯片等），这些方法只用于样品的初筛，即初步判定样品是否携带某些病原细菌，但不作为结果判定的最终依据。所以，分离获得目标病原菌是检验结果的证据，也是植物病原细菌检疫工作的关键。

目前虽然病原菌分离的方法较多，通过分析，均不适应当前植物检疫工作需要具有快速、准确等特点。若干不同分离方法的比较见表1。目前来看，基于免疫吸附技术的分离方法是植物病原细菌检疫中的最有效手段。虽然免疫磁珠法具有自动化程度高，分离效果较好的优点，但是方法中采用的设备成本高。因此探寻一种新的分离方法，以适应当前植物检疫工作需要快速、准确的要求势在必行。

                                表1

分离方法原理成本效果通用培养基病菌生理生化特点低无选择性，容易被杂菌污染，分离效果差。选择性培养基病菌生理生化特点低开发困难，分离效果一般，应用范围有限，不能应付杂菌较多情况。接种分离方法病菌致病性特点低方法简单易操作，应用范围有限，分离时间周期较长，效果较好。免疫磁珠法免疫吸附高自动化程度高，分离效果较好。

发明内容

鉴于上述现有技术存在的问题和不足，本发明提供一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法。该方法主要针对植物检疫工作中病原细菌进行快速、有效的分离，也可应用于食品中有害细菌的分离以及环境体系中目标细菌的分离。

本发明采取的技术方案是：一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法，其特征在于，该方法应用丝状聚合材料作为载体，将捕获目标病原菌的抗体包被在丝状载体上，经过缓冲液洗涤，将包被好抗体的丝状载体放入样品抽提缓冲液中进行捕获反应，捕获反应完成后，用无菌水洗涤丝状载体，之后将丝状载体放置于培养基上，根据捕获目标病原菌的生长条件进行培养，24小时-72小时后观察到丝状载体边缘有菌落生长，根据目标病原菌菌落特征进行分离纯化。

由于丝状载体（例如钓鱼线）很细，不易操作，可用小夹子固定若干条钓鱼线来进行包被、捕获等步骤。菌体捕获完成后，将钓鱼线晾干3分钟-5分钟，且培养基表面较干燥效果为好。