[发明专利]对蒙古人种和高加索人种低免疫原性的、抗EGFR的人鼠嵌合抗体

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一个与EGFR特异性结合，但对蒙古人种及高加索人种适用的、低免疫原性的人鼠嵌合抗体分子实体及其应用。

本发明主要涉及通过基因工程手段将已经上市的西妥昔单抗（Cetuximab，Erbitux）进行基因工程改造，突变其恒定区对蒙古人种产生高免疫原性的氨基酸，使得改造后的人鼠嵌合性抗体更适用于蒙古人种、高加索人种的基因表型。本发明还涵盖了该抗体在治疗肿瘤，尤其是EGFR高表达的头颈癌、结直肠癌和胃癌中的应用。

背景技术

研究发现，表皮生长因子受体（EGFR）信号转导途径在肿瘤细胞的增殖、损伤修复、侵袭及新生血管形成等方面起重要作用。更进一步研究发现，EGFR高表达的头颈癌患者及转移性结直肠癌患者对EGFR抑制剂治疗反应敏感。这种良好的敏感性在EGFR基因未突变但KRAS基因突变的上述患者中更为显著。

西妥昔单抗（中文商品名：爱必妥，英文商品名：Erbitux）由英克隆公司（目前是礼来的全资子公司）研发，并于2004年在美国、欧洲上市，2006年中国上市。西妥昔单抗可与表达于肿瘤细胞表面的EGFR特异性结合，通过3大机理杀死转移性结直肠癌细胞和头颈癌细胞:(1)与内源性配体竞争结合EGFR，阻断肿瘤细胞增殖的信号通路；其亲和力高于内源性配体如EGF及TGF-α；（2）Erbitux引发了了抗体介导的EGFR受体二聚、内吞及降解，下调了EGFR受体的表达，增强了肿瘤细胞对放化疗的敏感性；（3）Erbitux具有ADCC效应，对肿瘤细胞进行杀伤（Mitchell,Nature Biotechnology,2004,V22:363-364.）。自西妥昔单抗上市以来，很快在临床上得到广泛应用并跨入重磅炸弹药物行列，其2012年全球销售已达11.5亿美元（彭博社消息，2013年6月1号消息）。

尽管西妥昔单抗的上市给EGFR高表达肿瘤患者带来巨大的福音，随着科学研究的进展及临床观察及荟萃分析，西妥昔单抗在临床上也存在下述潜在问题：（1）西妥昔单抗治疗效果在不同患者个体之间差异较大，即使针对EGFR未变异、KRAS基因变异的高有效群体患者也是如此（Misale et al.,Nature,2012，V486:532-536.）；（2）患者经西妥昔单抗治疗一段时间后，患者会发生获得性抵制（Montagut et al.,Nature Medicine,2012,V18:221-223;）,从而影响了西妥昔单抗的治疗效果。这种获得性抵制主要由在患者机体能随着西妥昔单抗给药次数的增加而产生了针对西妥昔单抗的抗体。患者机体产生针对西妥昔单抗的抗体，会由下述3种原因引起：（1）西妥昔单抗是人鼠嵌合性抗体，其中鼠源的区序列会引起机体的免疫反应；（2）西妥昔单抗由鼠杂交瘤NS0细胞生产，产品中含有约30%Di-α1,3GalGal修饰的组分，这种组分在人体内会引起比较强的免疫原性（Jefferis.Nature Reviews Drug Discovery,2009,V8:226-234.）；（3）由患者基因多态性引起的免疫原性（Jefferis et al.,mAbs，2009，V1：1-7；P.Pandey.mAbs,2012,V4:553-554.）其中不同人种间基因多态性决定了西妥昔单抗的治疗性抵制与不同患者个体间治疗效果的差异。

西妥昔单抗构建主要基于高加索人种免疫球蛋白G1m3同种异型氨基酸，这种选择使得西妥昔单抗在用于蒙古人种的治疗时更容易因产生抗体而发生西妥昔单抗的治疗性抵制。因此，针对一个很好靶点及已取得很好疗效的西妥昔单抗，在蒙古人种的治疗上仍存在进一步改良的、迫切的需要，以在临床上发挥更佳的临床效果，用于头颈癌、结直肠癌及胃癌的治疗。

发明内容

针对上述西妥昔单抗在临床应用中的限制，本发明通过突变西妥昔单抗重链恒定区的氨基酸，获得更适于蒙古人种和高加索人种的、抗EGFR的单克隆抗体，其结构式见SEQ ID：1（发明所述抗体的重链）与SEQ ID：2（发明所述抗体使用与西妥昔单抗相同的轻链）。含轻、重链基因的载体经真核细胞分泌表达，形成由16对2硫键连接的本发明所述的完整抗体：

本发明的目的是进一步提升西妥昔单抗在临床上的普适性及安全性，提供一种更适于蒙古人种和高加索人种的、抗EGFR的、提升其临床安全性的单克隆抗体。

本发明的另一个目的是提供上述单抗在制备肿瘤药物中的应用。