[发明专利]将dsRNA引入植物种子以调节基因表达的方法

权利要求书

1.用于产生具有昆虫抗性的植物的方法，所述方法包括：a) 将未萌发的分离的种子浸泡在包含不可转录的dsRNA分子的溶液中，所述dsRNA分子含有包含呈反义或有义方向的害虫基因的18或更多个连续核苷酸的至少一个区段的至少一个多核苷酸链，其中在所述溶液中振荡所述未萌发的分离的种子达至多24小时，和b) 使分离的种子萌发以产生自分离的种子显现后表现出昆虫抗性的植物。

2.权利要求1的方法，其中在自分离的种子显现后所述植物不包含可检测水平的所述dsRNA分子。

3.权利要求1的方法，其中所述害虫基因选自ATP酶、NADPH细胞色素P450氧化还原酶、IAP、壳多糖合酶、EF1α和β-肌动蛋白。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述植物对棉贪夜蛾、玉米幼芽根叶甲或马铃薯甲虫侵染具有抗性。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述不可转录的dsRNA分子与内源植物基因在至少25个连续bp上具有至少80%同一性。

6.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述方法进一步包括在引入不可转录的dsRNA分子之前引发分离的种子。

7.权利要求6的方法，其中所述引发如下实行：

(i) 在引入不可转录的dsRNA分子之前洗涤分离的种子；和

(ii) 在步骤(i)之后干燥分离的种子。

8.处理分离的种子以改良自分离的种子长出的植物的昆虫抗性的方法，所述方法包括：将未萌发的分离的种子浸泡在包含含有以下序列的外源dsRNA分子的溶液中：所述序列与害虫基因或自所述害虫基因转录的RNA序列的至少18个连续核苷酸基本相同或与其基本互补，其中在所述溶液中振荡所述未萌发的分离的种子达至多24小时，并且其中相比对照植物，所述自所述未萌发的分离的种子长出的植物表现出改良的昆虫抗性，以及其中在萌发后所述dsRNA存在于植物中至少10天。

9.权利要求8的方法，其中所述方法进一步包括在引入外源dsRNA分子之前引发分离的种子。

10.权利要求9的方法，其中所述引发如下实行：

(i) 在引入外源dsRNA分子之前洗涤分离的种子；和

(ii) 在步骤(i)之后干燥分离的种子。

11.权利要求10的方法，其中在双重去离子水存在下实行洗涤。

12.权利要求10的方法，其中实行洗涤2-6小时。

13.权利要求10的方法，其中洗涤在4-28℃下实行。

14.权利要求10的方法，其中干燥在25-30℃下实行10-16小时。

15.权利要求8的方法，其中在20-150 µg/ml浓度的外源dsRNA分子存在下实行引入。

16.权利要求8的方法，其中在包含0.1 mM EDTA的溶液中将所述外源dsRNA分子引入分离的种子。

17.权利要求8的方法，其中在物理作用剂存在下实行外源dsRNA分子的引入。

18.权利要求17的方法，其中所述物理作用剂是PEG-修饰的碳纳米管。