[发明专利]具有多能性（pluripotency）的干细胞的培养方法

说明书

技术领域

本公开涉及一种具有多能性的干细胞的培养方法、除去在具有多能性的干细胞的培养中产生的或可产生的脱离未分化状态的细胞的方法、维持具有多能性的干细胞的未分化状态的方法、这些方法中使用的组合物、及这些方法中使用的试剂盒。

背景技术

在大量培养人iPS细胞等多能性干细胞时，通过一系列的扩增培养(继代培养)的重复制备许多未分化的细胞。已知有在该一系列的培养中，从未分化状态脱离的细胞“脱未分化细胞”偶发地产生。

已知有该脱未分化细胞具有与未分化细胞大致同等分裂能力，且诱发从未分化细胞向脱未分化细胞的转换。即，脱未分化细胞产生时，其增殖速度超过未分化细胞的增殖速度，未分化细胞的增殖得到抑制。

脱未分化细胞的产生在不熟练的培养操作者的培养中较多地观察到。另外，已知有集落尺寸的过大或集落彼此的合并成为产生的一个原因。因此，通过低汇合下的继代、维持播种时的均匀性，可以某种程度上降低脱未分化细胞的产生频率。另外，利用近年来所开发的培养基，也某种程度上抑制脱未分化细胞的产生频率。但是，尽管如此，脱未分化细胞偶发地产生，在产生的情况下，除去含有脱未分化细胞的集落还是必须的。

为了维持未分化状态，含有脱未分化细胞的集落在继代时通过显微镜下的吸量管操作而慎重地被除去。模仿有这种集落除去的方法的装置、例如组合有利用观察装置和机器人操作的吸量管的装置也被开发。

另外，在专利文献1中，公开有：为了一边维持iPS细胞等多能性干细胞的未分化一边增殖，在活化素存在下将多能性干进行细胞培养。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2012-143229号公报

发明内容

发明所要解决的课题

如上所述，在人iPS细胞等多能性干细胞的继代培养中，容易引起脱未分化现象，未分化维持困难，在数次的继代后，许多iPS细胞集落引起脱未分化现象，可以成为含有脱离未分化状态的细胞的劣化集落。因此，慎重的培养及慎重的集落的挑选这样的繁琐的操作不可缺少。从促进干细胞产业的方面考虑点，也期望繁琐的操作少、即使没有熟练者也可以的、多能性干细胞的未分化维持方法。

本公开在一实施方式中，提供一种可以除去在具有多能性(“pluripotency”、以下同样)的干细胞的培养中的集落中产生的“脱离未分化状态的细胞”的方法。

用于解决课题的手段

本公开在一实施方式中涉及一种具有多能性的干细胞的培养方法，其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。本公开在其它实施方式中涉及一种除去在具有多能性的干细胞的培养中产生的或可产生的脱离未分化状态的细胞的方法，其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。本公开在其它实施方式中涉及一种维持具有多能性的干细胞的未分化状态的方法，其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。本公开在其它实施方式中涉及一种用于在本公开中所述的上述的方法中使用的、含有可阻碍细胞间粘接的物质的组合物。本公开在其它实施方式中涉及一种含有具有多能性的干细胞用的培养基成分和可阻碍细胞间粘接的物质的试剂盒。

发明效果

根据本公开，在一实施方式中，能够起到可以除去在具有多能性的干细胞的培养中的集落产生的“脱离未分化状态的细胞”的效果。

附图说明

图1是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落产生的“脱离未分化状态的细胞”通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的图。

图2是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落产生的“脱离未分化状态的细胞”通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的图。

图3是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落产生的“脱离未分化状态的细胞”通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的图。

图4是说明本公开的一实施方式中的、在具有多能性的干细胞的培养中的集落上产生的“脱离未分化状态的细胞”通过可阻碍细胞间粘接的物质的添加而被除去的情形的图。

图5是说明实施例中进行的实验的程序表的图。

图6为将终浓度100nM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。

图7为将终浓度50nM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。

图8为将终浓度10nM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。

图9为将终浓度1nM的HA-1添加于day3时的显微镜观察照片的一例。