[发明专利]AAV 变体

说明书

本发明提供了包含具有选自序列表的SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:30氨基酸序列的腺伴随病毒（AAV）衣壳蛋白质的AAV颗粒；编码该衣壳蛋白质的核酸；含有该核酸的DNA；含有该DNA的细胞；和生产该细胞的方法。

技术领域

本发明涉及编码腺伴随病毒（AAV）衣壳蛋白质变体的核酸、包含衣壳蛋白质变体的AAV颗粒和通过使用所述颗粒生产基因转导细胞的方法。

领域背景

AAV是具有4.7 kb的线性单链DNA基因组的病毒，其包括两种基因rep和cap的开放读码框。rep基因编码基因组复制所需的四种蛋白质（Rep78、Rep68、Rep52和Rep40）。cap基因表达装配用于病毒衣壳形成的三种衣壳蛋白质（VP1、VP2、VP3）和装配激活蛋白质（assembly-activating protein）（AAP）。AAV的复制实质上依赖于辅助病毒，诸如腺病毒或疱疹病毒的存在。在不存在辅助病毒的情况下，AAV的基因组维持在附加体状态或整合至宿主的染色体中，所以AAV是以潜伏状态存在。目前鉴定了AAV的超过100种血清型和分化体（clade）（非专利文献1）。特别地，基于AAV2的用于基因递送的载体的发展是先进的。

在1989年，首次开发了基于AAV2的基因递送载体系统。已经发现基于AAV的载体具有很多优点。因为野生型AAV是非致病的，并且不具有与任何已知疾病的病原关系，相信基于AAV的载体是极其安全的。此外，AAV具有高基因转导效率。

AAV颗粒的施用能够长期并且稳定的将基因转导至多种靶器官和靶细胞中。到目前为止，已经报道了对骨骼肌、肝脏（肝细胞）、心脏（心肌细胞）、神经细胞、胰腺细胞和胰岛细胞的高效率基因转导。此外，AAV已经被用于人临床试验。在另一方面，已经进行了通过改造AAV衣壳蛋白质以改变AAV细胞嗜性（cell tropism）的尝试和通过中和抗体避免AAV颗粒移除的尝试。例如，已经建立了对特定器官和细胞，诸如神经胶质细胞、呼吸道上皮细胞、冠状动脉血管内皮细胞（coronary artery vascular endothelial cell）和肺具有嗜性的AAV衣壳，以及对肿瘤细胞，诸如成胶质细胞瘤细胞、黑素瘤细胞、肺癌细胞和乳腺癌细胞具有嗜性的AAV衣壳（非专利文献2）。

引用列表

非专利文献

非专利文献1：Gao 等人, J.Virology, Vol.78, pp. 6381-6388,2004

非专利文献2： Adachi K. 等人, Gene Ther. Regul. Vol. 5,pp. 31-55,2010。

发明概述

通过本发明解决的问题

本发明的目的包括提供对心脏和免疫器官，特别地，对淋巴结具有嗜性的AAV衣壳蛋白质，并且提供将基因高效率地导入淋巴结的方法。

对问题的解决

本发明为解决上文描述的问题进行了集中地努力，并且结果建立了包括具有选自序列表SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：30的氨基酸序列的AAV衣壳蛋白质。因此完成本发明。

本发明一般性涉及：

[1]编码腺伴随病毒（AAV）衣壳蛋白质变体的核酸，所述变体包含具有选自序列表SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：30的氨基酸序列的肽；

[2]根据[1]的所述核酸，其中AAV衣壳蛋白质来源于AAV2；

[3]根据[1]的所述核酸，其中所述肽位于AAV2的VP1中氨基酸编号588后接的位置处；