[发明专利]糖脂质的制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及新型醇氧化酶以及编码该醇氧化酶的基因。另外，本发明涉及使该醇氧化酶缺失等而得到的转化体以及使用该转化体的糖脂质的制造方法。

背景技术

作为糖脂质的一种的烷基葡萄糖苷或者槐糖脂(sophorose lipid)是作为表面活性剂而配合于各种洗涤剂等中。

烷基葡萄糖苷或者槐糖脂的工业生产主要是以糖和醇作为原料通过化学合成来进行，但是存在需要大量原料醇，并且由于进行高温·高压下的反应而原料葡萄糖会改性等的问题。

从这样的实际情况出发，寻求更高效率的生产方法，探讨了使用微生物的糖脂质的制造技术。例如，已知如果在含有糖和醇的培养基中培养作为酵母的1种的假丝酵母菌(Candida bombicola)，则作为产物可以得到烷基槐糖苷(alkyl sophoroside)或者槐糖脂(参照专利文献1和非专利文献1)。

现有技术文献

专利文献1：美国专利第6433152号说明书

非专利文献1：Biotechnology Letters,Volume 20,No.3,1998,pp.215-218

发明内容

然而，使用上述微生物的制造方法虽然能够进行常温·常压下的糖脂质制造，但是存在糖脂质相对于原料醇的收率非常低的问题。

在此，本发明的课题在于，提供在常温·常压下能够生产率良好地制造糖脂质的微生物转化体、以及使用该转化体的糖脂质的制造方法。

本发明者们针对使用微生物的糖脂质的制造技术进行了专门探讨，结果发现：在假丝酵母菌(Candida bombicola)的醇代谢路径中，有新型的醇氧化酶参与。进一步发现，用使该醇氧化酶基因的功能降低的转化体会显著提高糖脂质的生产率。本发明是基于这些发现完成的。

即，本发明涉及一种转化体(以下也称为“本发明的转化体”)，其在具有编码下述(a)～(c)中任一种蛋白质的基因的宿主中，该基因缺失、变异或者表达抑制，并且与该宿主相比醇氧化酶活性降低。

(a)由序列号1所表示的氨基酸序列构成的蛋白质；

(b)由与序列号1所表示的氨基酸序列具有50％以上的同一性的氨基酸序列构成，并且具有醇氧化酶活性的蛋白质；

(c)由在序列号1所表示的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换、插入、或者附加而成的氨基酸序列构成，并且具有醇氧化酶活性的蛋白质。

另外，本发明涉及包括下述(1)和(2)的工序的糖脂质的制造方法(以下也称为“本发明的糖脂质的制造方法”)。

(1)在含有醇和糖的培养基中培养上述转化体的工序；以及

(2)从所得到的培养物中采集糖脂质的工序。

另外，本发明涉及编码上述(a)～(c)中任一种蛋白质的基因(以下也称为“本发明的基因”)。

另外，本发明涉及上述(a)～(c)中任一种蛋白质(以下也称为“本发明的蛋白质”)。

根据本发明，可以提供对糖脂质的高效生产有用的新型醇氧化酶以及编码该醇氧化酶的基因。另外，根据本发明，可以提供糖脂质的生产能优异的转化体。进一步，根据本发明，可以提供生产率优异且对糖脂质的工业生产有用的糖脂质的制造方法。

本发明的上述以及其它特征和优点通过参照适当的附图，从下述的记载更明确。

附图说明

[图1]是将实施例中制作的KSM36株、NBRC10243株、KSMΔura3株中ura3基因区域的序列的一部分进行比较的图。

[图2]是表示将实施例中制作的KSMΔura-ura株和KSMΔAOX株改变碳源进行培养，每段培养时间的活菌数的图。

[图3]是表示在实施例中制作的KSMΔura-ura株和KSMΔAOX株中醇氧化酶活性的图。

[图4]是表示在实施例中制作的BL21(DE3)-pET-AOX株和BL21(DE3)-pET株中，表达蛋白质的检测结果的图。

[图5]是表示在BL21(DE3)-pET-AOX株和BL21(DE3)-pET株中醇氧化酶活性的图。