[发明专利]NME变体物种表达和抑制

说明书

技术领域

本申请涉及操纵NME家族蛋白质以及它们的相关因子的表达以调节干细胞样生长和治疗癌症的领域。

背景技术

NM23以蛋白质家族存在，其中，这些蛋白质之间的共性是存在催化ATP转化为ADP的核苷二磷酸激酶(NDPK)结构域。先前，已知NM23作为肿瘤转移因子。其中近来识别的十个NM23家族成员，现在它们还以NME蛋白质1-10为人熟知(Mol Cell Biochem(2009)329:51-62,“The mammalian Nm23/NDPK family:from metastasis control to cilia movement,”Mathieu Boissan,Sandrine Dabernat,Evelyne Peuchant,Uwe Schlattner,Ioan Lascu,and Marie-Lise Lacombe)。

科学家首先从人白血病细胞分离了分化抑制因子并且表明添加这种因子阻断某些类型的白血病细胞和髓系细胞的化学诱导的分化(Okabe-Kado,1985,Cancer Research 45,4848-4852,“Characterization of a Differentiation-inhibitory Activity from Nondifferentiating Mouse Myeloid Leukemia Cells)，随后，将该抑制因子确定为NME1(NM23-H1)(Okabe-Kado,1992,“Identity of a differentiation inhibiting factor for mouse myeloid leukemia cells with NM23/nucleoside diphosphate kinase”,Biochem Biophys Res Comm,182No.3987-994)。白血病细胞是受阻于终末分化的血细胞。有趣地，示出抑制白血病细胞的分化的能力不依赖于其催化结构域。终止其酶活性的NDPK结构域中的突变对蛋白质阻断一些类型的白血病细胞的分化的能力不具有影响。然而，关于NM23是否抑制分化、加速分化或根本不具有影响，随后数十年的科学文献描绘了完全混乱的图画。

多篇研究文章提供了表明NM23诱导分化的证据。Rosengard等，1989；Dearolf等，1993；以及Timmons等，1993报导了对于适当的分化，需要体内果蝇NM23同源物awd。Lakso等，1992，报导了随着组织分化的开始，NM23(小鼠体内)增加，表明其诱导分化。Yamashiro等，1994报导了在人红白血病细胞的分化过程中体外NM23水平增加。Lombardi等，1995得出的结论是随着细胞分化的开始NM23(小鼠体外)增加，再次表明NM23诱导分化。Gervasi，1996报导了NM23(大鼠体外)的过表达诱导了神经元分化，并且利用反义DNA下调NM23抑制了分化。Amendola等，1997表明在人神经母细胞瘤细胞中转染NM23增加了分化。

与报导了NM23诱导分化的多篇研究文章直接矛盾的是，在同一时间段内出版的相等数量的文章报导了相反的结果：NM23抑制分化。Munoz-Dorado等，1990发现了ndk(粘球菌(Myxococcus)NM23同源物，体内)对于生长是必要的，但在发育过程中被下调，表明它的存在将抑制分化。Okabe-Kado，1992示出体外分化抑制因子(随后由相同的组确定为NM23)抑制了小鼠白血病的分化。Yamashiro等，1994报导了在人原始巨核细胞(megakaryoblast)的分化过程中NM23水平下降，符合NM23抑制分化。Okabe-Kado，1995示出重组NM23抑制白血病细胞系HEL、KU812以及K562的红系细胞分化(erythroid differentiation)，而不是祖细胞HL60、U937或HEL/S细胞的单核细胞或粒细胞分化。Venturelli等，1995报导了NM23过表达抑制了人造血祖细胞的G-CSF依赖性粒细胞分化。Willems等，1998发现了当来自骨髓细胞的人CD34⁺造血祖细胞分化时，NM23表达降低。在2002年，Willems等表明了NM23对细胞增殖不具有影响，不诱导或抑制分化，但使CD34+细胞的分化偏好红系细胞世系。