[发明专利]高产量地分离包括小RNA的RNA的方法

权利要求书

1.一种从样品分离RNA，包括长度为200nt或更少的小RNA的方法，包括以下步骤：

a)提供包含RNA和离液剂的组合物；

b)加入醇；其中

i)步骤b)中醇的加入量相当于为在步骤e)中进行结合而加入的总醇浓度的40％至80％，和/或

ii)步骤b)中醇的加入量，使得所得混合物包含的醇浓度范围选自：25％(v/v)至45％(v/v)；

c)温育步骤b)的混合物至少2分钟；

d)将额外的醇加入步骤c)的温育的混合物以将混合物中的总醇浓度调节至≥50％v/v；

e)将该混合物中所含的RNA结合至核酸结合固相，其中在步骤e)之后，RNA，包括小RNA结合于该同一核酸结合固相；

f)任选地洗涤该结合的RNA；和

g)任选地从固相洗脱RNA；

其中，所述醇选自：甲醇、乙醇、丙醇和它们的混合物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤c)中，利用蛋白水解酶进行蛋白水解消化。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

i)步骤b)中醇的加入量相当于为在步骤e)中进行结合而加入的总醇浓度的55％至65％；和/或

ii)步骤b)中醇的加入量，使得所得混合物包含的醇浓度范围选自：30％至40％(v/v)。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

i)步骤b)中醇的加入量相当于为在步骤e)中进行结合而加入的总醇浓度的55％至65％；和/或

ii)步骤b)中醇的加入量，使得所得混合物包含的醇浓度范围选自：30％至40％(v/v)。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤c)中：

i)在15℃至30℃的温度下进行温育；和/或

ii)温育至少2.5分钟。

6.如权利要求5中所述的方法，其特征在于，在步骤c)中：ii)温育至少3分钟。

7.如权利要求5中所述的方法，其特征在于，在步骤c)中：ii)温育至少5分钟。

8.如权利要求5中所述的方法，其特征在于，在步骤c)中：ii)温育至少为7.5分钟。

9.如权利要求5中所述的方法，其特征在于，在步骤c)中：ii)温育至少10分钟。

10.如权利要求2-4中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤c)中温育的混合物包含：

-RNA；

-离液盐，浓度选自：1-5M；

-蛋白水解酶；和

-醇，其浓度选自：≥25％(v/v)和≤42.5％(v/v)。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述离液盐的浓度为1.5-4.5M。

12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述离液盐的浓度为2-4 M。

13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述离液盐的浓度为2.5M-3.75M。

14.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤c)中温育的混合物包含：

-RNA；

-离液盐，浓度选自：1-5M；

-蛋白水解酶；和

-醇，其浓度选自：≥25％(v/v)和≤42.5％(v/v)。

15.如权利要求1-4和14中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤b)和步骤d)中加入的醇具有一种以下特征：

ii.其选自：甲醇、乙醇、异丙醇和它们的混合物；

iii.其选自：异丙醇和乙醇；

iv.其是乙醇。