[发明专利]大豆事件pDAB9582．816．15．1检测方法

说明书

大豆事件pDAB9582.816.15.1包括含有编码Cry1F、Cry1Ac(synpro)和PAT的基因的基因表达盒，其为含有该事件的大豆植物提供昆虫抗性和除草剂耐受性，并且使作物保护及储存制品保护方法能够实现。本公开提供了与多核苷酸相关的事件检测方法。本公开涉及一种用于检测新的昆虫抗性和除草剂耐性的转基因大豆转化事件的方法，该事件称为大豆事件pDAB9582.816.15.1。含有此事件的大豆植物的DNAA包含如本文所述的接点/侧翼序列，它们可表征大豆基因组内插入的DNA的位置。SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2能够诊断大豆事件pDAB9582.816.15.1。

优先权声明：本公开文本要求于2012年6月25日提交的美国临时申请 61/663,687的优先权。其信息整体并入本文。

发明背景

编码Cry1F和Cry1Ac synpro(Cry1Ac)的基因能够对转基因植物赋予昆虫抗性，例如对鳞翅目(lepidopteran)昆虫的抗性；而编码PAT(膦丝菌素乙酰转移酶)的基因能够对转基因植物赋予对除草剂膦丝菌素(草胺膦)的耐受性。PAT已经在大豆中成功表达，既在生成昆虫抗性转基因作物中用作选择标志物，又在转基因作物中赋予对除草剂草胺膦的产业水平的耐受性。

已知转基因在植物中的表达受到其在植物基因组中位置的影响，这可能是由于染色质结构(例如异染色质)或整合位点附近的转录调节元件(例如增强子)的接近性所致(Weising等,Ann.Rev.Genet 22:421-477,1988)。转基因在基因组中不同位置处的存在会以不同方式影响植物的总体表型。例如，在植物中及在其它生物体中已经观察到引入基因的表达水平在事件与事件之间可以有较大的变化。还可能有空间或时间上的表达差异，例如转基因在各种植物组织中的相对表达差异，这样的差异可能与从导入的基因构建体中存在的转录调节元件预期的方式不对应。出于此原因，常见的做法是生成数百至数千个不同事件，并且从这些事件中筛选具有对于产业目的有利的转基因表达水平和方式的单一事件。因此，常常有必要筛选大量转基因事件以鉴定以引入的感兴趣基因的最佳表达为特征的具体转基因事件。具有期望的转基因表达水平或方式的事件可用来将转基因渗入(introgress)其它遗传背景中，方法是使用常规育种方法进行有性异性杂交(outcrossing)。此类杂交的后代维持初始转化体的转基因表达特征。该策略被用于确保完全适合于局地生长条件的多种品种的可靠的基因表达。

人们期望能够检测特定事件的存在以确定有性杂交的后代是否含有感兴趣的转基因或转基因群组。另外，用于检测特定事件的方法会有助于例如遵守要求自重组作物植物衍生的食物的销售前批准和标签的监管，或者有助于用于环境监测，监测田间作物的性状，或者监测自作物收获物衍生的产品，以及用于确保服从管理或合同条款的各方的顺应性。

有可能通过本领域中已知的任何核酸检测方法，包括但不限于聚合酶链式反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交，来检测转基因事件的存在。这些检测方法一般聚焦于常用的遗传元件，诸如启动子、终止子、标志物基因，等等，因为对于许多DNA构建体，编码区是可互换的。这导致此类方法可能无法用于区别不同的事件，特别是使用相同DNA构建体或非常相似的构建体生成的那些事件，除非与插入的异源DNA相邻的侧翼DNA的DNA序列是已知的。例如，对于玉米事件DAS-59122-7，事件特异性PCR测定法记载于美国专利申请2006/0070139。希望有一种简单而有区分力的方法来鉴定大豆事件pDAB9582.816.15.1。

发明概述