[发明专利]包含固醇修饰的脂质和纯化的分枝杆菌脂质细胞壁组分的脂质体组合物及其在肺结核诊断中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及含有固醇修饰的脂质和纯化的分枝杆菌脂质细胞壁组分的脂质体组合物，其在活动性肺结核的诊断中被用作用于检测抗原特异性生物标志物抗体的抗原呈递的载体。

背景技术

迄今为止，还没有用于诊断肺外TB、小儿TB和HIV共感染TB的可靠的商业检测方法。也没有用于诊断TB的可靠的基于血液的方法。目前，所有的商业方法都是基于血清样品。精确检测低亲合性患者的抗-分枝菌酸(MA)抗体(作为活动性肺结核的生物标志物)的能力会完全改变现状。这样的方法是存在的，并且被称为分枝菌酸抗体实时抑制测试(MARTI-测试)(Verschoor et al.,2005,Thanyani et al.,2008,Lemmer et al.,2009)。MARTI-测试能够区分两种低亲合性抗体系统：无所不在的抗-胆固醇抗体和TB患者特异性抗-MA抗体，其是交叉反应性的。这通过使用表面等离子体共振(Lemmer et al.,2009)、或电阻抗生物传感器技术(Mathebula et al.,2009)来实现。本发明本身涉及改善脂质抗原固定化技术以使得其在能够支持MARTI-测试的任何技术平台上更适合用于实际诊断应用。

TB诊断学

肺结核(TB)是一种由通常感染肺的结核分枝杆菌造成的细菌性疾病。现今，世界人口的大约三分之一被感染并且每年出现接近两百万例死亡。其是免疫低下个体(例如HIV患者)的主要死因(Vassall et al.,2011)。肺结核是一种复杂的疾病，其能够诱发体液和细胞免疫应答。目前，对于活动性肺TB诊断的黄金标准仍然是临床检查与来自血清的分枝杆菌培养检查联用(Andersen et al.,2000)。这种方法会耗费至少六周的时间(Van Deun et al.,2010)，在该期间内患者可能已经感染了朋友和家人、同事、公共交通工具上的乘客和医务人员。对于耐酸细菌(AFB)的涂片显微镜检查更快且成本更低，但其灵敏度较低，通常仅在晚期成年肺TB患者中显示达到阳性，此时，该患者已经经受了不可逆的肺部损伤。

HIV共感染和TB诊断

GeneXpert和其他核酸扩增测试(NAATs)对于免疫低下患者(例如那些患有HIV共感染的患者)的诊断不够灵敏。当患有HIV共感染时，细菌经常会从肺部逃逸，这导致血清中含有不足以被涂片显微镜、分枝杆菌培养物或甚至是抗原特异性NAATs检测的细菌数目(Wilson,2005)。

据WHO报告，2009年在南非有超过72％的TB患者为HIV共感染。南非是世界上TB和AIDS患病率最高的国家(Floyd et al.,2011)，从而极大地降低了GeneXpert分析的效果。另一种并发症是AIDS和TB之间的拮抗关系，其在至少90％的未经治疗患者中发生并导致在数月内死亡(WHO 2011,Gandhi et al.,2006)。

肺外TB的诊断

肺外TB的发生是由于淋巴结、胸膜或脑膜组织、中枢神经系统、骨骼和/或关节、泌尿生殖器官、腹腔、皮肤或其他散播性部位的感染(Steingart et al.,2011)。肺外TB的诊断遭遇了许多挑战，其尚未由具体的诊断方法获得解决。这就迫使临床医师仅凭经验对高风险患者开出长期治疗的处方(Rao,2007)，使得这些患者承担可由精确诊断避免的治疗副作用。由此，很好地解释了对于功能性血清学肺外TB诊断的需求。

小儿TB的诊断

在儿童中的肺结核诊断比在成年患者中更复杂。这是由于在血清样品中通常获得低细菌负载量。最近于2011年对于GeneXpert系统用于检测小儿TB的能力进行了研究。结果表明，对于年龄为15岁及以下的涂片呈阴性的儿童，具有98.8％的特异性，而灵敏度则低至27.8％(Nicol et al.,2011)。这暗示了尽管现代诊断学有所发展，但小儿TB仍然难以诊断。

免疫分析

抗体免疫分析的基本原理是检测抗体与抗原的结合。免疫分析使用了这样的事实，即在对外来生物如细菌和病毒的响应中，免疫系统会产生高度特异于几乎无限量的抗原的抗体。产生这些抗体的目的在于标记将要被破坏的靶细胞。如果能够获得纯化的抗原，就能够在免疫分析中检测特异于该抗原的抗体。