[发明专利]多价脑膜炎球菌缀合物及制备缀合物的方法

权利要求书

1.制备免疫原性缀合物的方法，包括

在2℃至6℃下将至少一种多糖与氰基化试剂反应1-3小时，得到氰酸酯-活化的多糖；及

使至少一种氰酸酯-活化的多糖与至少一种蛋白质在pH 5至8，2℃至6℃下接触，使得所述至少一种氰酸酯-活化的多糖与所述至少一种蛋白质反应，得到包括至少一个在所述至少一种多糖和所述至少一种蛋白质之间形成的C-N键的免疫原性缀合物。

2.权利要求1的方法，还包括：

在将所述至少一种氰酸酯-活化的多糖与所述至少一种蛋白质接触前，将所述至少一种蛋白质与肼、羰酰肼、盐酸肼、二酰肼或其混合物在2℃至6℃反应，产生至少一种酰肼-活化的蛋白质溶液。

3.权利要求2的方法，其中将所述至少一种蛋白质与肼、羰酰肼、琥珀酰二酰肼、己二酸二酰肼或其混合物在碳二亚胺盐酸盐的存在下、在pH 6至7下反应，得到酰肼-活化的蛋白质溶液。

4.权利要求3的方法，其中所述碳二亚胺包括1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述氰基化试剂包括1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)、1-氰基-4-吡咯烷基吡啶四氟硼酸盐(CPIP)、溴化氰、对-硝基苯基氰酸酯(pNPC)或四氟硼酸N-氰基-N,N,N-三乙基铵(CTEA)。

6.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述至少一种多糖包括脑膜炎球菌组A多糖、脑膜炎球菌组C多糖、脑膜炎球菌组W-135多糖、脑膜炎球菌组Y多糖，或其两种以上的组合。

7.权利要5的方法，其中所述至少一种多糖包括脑膜炎球菌组A多糖、脑膜炎球菌组C多糖、脑膜炎球菌组W-135多糖、脑膜炎球菌组Y多糖，或其两种以上的组合。

8.权利要求1-4和7中任一项的方法，其中所述至少一种蛋白质包括fHbp亚家族A(fHbp2)蛋白或其一部分、fHbp亚家族B(fHbp1)蛋白或其一部分，或其组合。

9.权利要5的方法，其中所述至少一种蛋白质包括fHbp亚家族A(fHbp2)蛋白或其一部分、fHbp亚家族B(fHbp1)蛋白或其一部分，或其组合。

10.权利要求6的方法，其中所述至少一种蛋白质包括fHbp亚家族A(fHbp2)蛋白或其一部分、fHbp亚家族B(fHbp1)蛋白或其一部分，或其组合。

11.权利要求8的方法，其中所述至少一种蛋白包括fHbp融合蛋白，所述fHbp融合蛋白包括fHbp1的至少一部分和fHbp2的至少一部分。

12.权利要求9或10的方法，其中所述至少一种蛋白包括fHbp融合蛋白，所述fHbp融合蛋白包括fHbp1的至少一部分和fHbp2的至少一部分。

13.权利要求1-4和7中任一项的方法，其中所述至少一种蛋白质包括奈瑟球菌表面蛋白A或其免疫原性部分。

14.权利要求5的方法，其中所述至少一种蛋白质包括奈瑟球菌表面蛋白A或其免疫原性部分。

15.权利要求6的方法，其中所述至少一种蛋白质包括奈瑟球菌表面蛋白A或其免疫原性部分。

16.药物组合物，其包含：

包含缀合至fHbp融合蛋白的脑膜炎球菌血清组A多糖的免疫原性缀合物；

包含缀合至fHbp融合蛋白的脑膜炎球菌血清组C多糖的免疫原性缀合物；

包含缀合至fHbp融合蛋白的脑膜炎球菌血清组W-135多糖的免疫原性缀合物；

包含缀合至fHbp融合蛋白的脑膜炎球菌血清组Y多糖的免疫原性缀合物。