[发明专利]使用侧链锚接赖氨酸的胰岛素的固相肽合成

权利要求书

1.一种用于固相合成保护的、部分保护的或未保护的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物的方法，该方法包括：

制备式I所示的赖氨酸-树脂缀合物，其中：

W为4-甲氧基三苯甲基树脂；

R是包含1至200个具有任选地保护的侧链和未保护的末端羧基的氨基酸的肽残基；

P为氢；氨基保护基；N-末端肽残基，该N-末端肽残基包含1至200个具有任选地保护的侧链和任选地保护的末端氨基的氨基酸，其中所述的N-末端肽残基包含C-末端和N-末端；

将式I所示的赖氨酸-树脂缀合物与保护的、部分保护的或未保护的肽残基Ib偶联，从而形成所述的保护的、部分保护的或未保护的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物，其中包含1至200个具有任选地保护的侧链和未保护的末端羧基的氨基酸的肽残基与所述的保护的、部分保护的或未保护的肽残基Ib一起构成胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物，

其中肽残基Ib为这样的肽残基序列特征，其包含保护的、部分保护的或未保护的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物的序列特征。

2.权利要求1所述的方法，其中P选自由以下构成的组：叔丁氧基羰基(Boc)；9-芴甲氧基羰基(Fmoc)；苄氧基-羰基，即，羧基苄基；l-(4,4-二甲基-2,6-二氧环己-l-亚基)-乙基(Dde)；2-硝基苯基硫基(Nps)；和烯丙氧基羰基(alloc)。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述的部分保护的、未保护的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物选自由甘精胰岛素的B链、赖脯胰岛素的B链、地特胰岛素的B链、门冬胰岛素的B链、德谷胰岛素的B链、以及它们的类似物或衍生物构成的组；并且

通过以下步骤进一步切割树脂结合的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物：使用有机酸和醇溶剂的混合物在弱酸性条件下与所述的树脂结合的肽接触，或者将所述的树脂结合的肽加热至升高的温度，或者既使用有机酸与醇溶剂的混合物又将所述的树脂结合的肽在升高的温度下加热足以将所述的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物由所述的树脂上切下的时间。

4.权利要求3所述的方法，其中所述的有机酸选自由三氟乙酸、乙酸和它们的混合物构成的组，所述的醇溶剂选自由三氟乙醇、六氟异丙醇、甲醇和它们的混合物构成的组，并使用微波来加热所述的树脂结合的肽。

5.权利要求3所述的方法，其中所述的部分保护的或未保护的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物选自由以下构成的组：N-酰化的衍生物、聚乙二醇化的衍生物、生物素化的衍生物、包含发色团的衍生物，或所述的部分保护的或未保护的胰岛素B-链或胰岛素B-链衍生物是由包含天然氨基酸残基、非天然氨基酸残基和它们的混合物的肽残基组成的。

6.一种用于制备选自人胰岛素B-链、甘精胰岛素的B链、地特胰岛素的B链、德谷胰岛素的B链、和Lys(生物素化)(B29)人胰岛素B-链中的胰岛素B-链肽的方法，包括：

通过下列步骤由式IV所示的肽-树脂缀合物上切割肽：

W—AA1—AAm IV

将所述肽-树脂缀合物与有机酸和溶剂的混合物接触；或者将所述的肽-树脂加热至升高的温度；或者既使用有机酸和溶剂的混合物又将所述的树脂结合的肽在升高的温度下加热至足以将肽残基由树脂W上切下的时间，

其中：

W为4-甲氧基三苯甲基树脂；

AA1为通过赖氨酸或赖氨酸衍生物的氨基侧链附着在W上的包含赖氨酸残基或其衍生物的第一肽残基：并且

AAm为第二至第m残基，其中m为1-200的整数。