[发明专利]用于检测微生物的干扰肽和方法

说明书

本发明涉及诊断领域。特别地，本发明涉及新的肽，其对于消除在基于免疫学分析体外检测生物学样品中微生物的存在时的干扰问题特别有用，所述干扰问题跟所测试的样品有关。

基于免疫学分析的检测方法广泛用于诊断领域。这些方法可以检测包括蛋白质(抗原/抗体)、肽和半抗原(例如，类固醇或维生素)形式的分析物。免疫学分析，也称为免疫测定法法或免疫酶测试，是本领域技术人员熟知的方法，涉及待测分析物和一种或多种与该分析物结合的伴侣之间的免疫学反应。举例来说，可能提及的这样的免疫测定法方法包括可按照“三明治”的原理或者按照“竞争”原理进行操作的方法，诸如ELISA、ELFA、CLIA、ECLIA、IRMA和RIA，以及免疫检测方法，例如免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹和点印迹。

这些免疫学分析的结果，接下来由实验室提供给医生，医生会解释这些结果以诊断病理状态，随后给病人提供适当的治疗。因此，对于这些分析尤其重要的是：高度敏感性，在这个意义上，它们不产生假阴性结果；以及高度特异性，在这个意义上，它们不产生假阳性结果。

一个损害这些分析的灵敏度以及尤其是特异性的原因是与所测试的样品相关的干扰的存在。每次待测试样品产生改变测试信号的反应时发生干扰，从而改变结果的正确值，例如通过提供不能与所述分析物区分开的信号，从而产生假阳性，或通过使信号减弱，从而当信号低于所用的试剂盒的检测阈值时，可能产生假阴性结果，(Tate and Ward,2004)。

在免疫学分析时，假阳性反应经常与非特异性抗原抗体反应相关，所述非特异性抗原抗体反应是由于测试样品中存在一些干扰分析的物质，诸如与用于所述分析的结合伴侣结合的抗体。例如，某些病人的血清中含有针对动物蛋白的人抗体，例如是在接种疫苗后产生的，所述抗体能够与作为所用的分析试剂盒的成分的动物免疫球蛋白反应，从而可以产生异常的分析结果。内源性的干扰物质既可能存在于获得自健康个体的样品，也可能存在于获得自具有病理性状况的或具有感染的个体的样品。这种干扰现象不依赖于患者的临床状态。

已对各种用于减少与所测试的样品相关的干扰反应的方法进行了描述。比如，已知的实践使用碳水化合物、蛋白质化合物、蛋白质混合物或水解产物(EP 0 260 903，US 4 931 385)。还描述了使用修饰的蛋白质，尤其是琥珀酰化和乙酰化的蛋白质(EP 0 525 916)，或者具有相对于天然序列进行了必要修饰的氨基酸序列的肽，比如基本上由D-氨基酸组成的肽(US 6153 393)。然而，这些办法都不能完全的消除所述分析中的假阳性的存在，并且加入这些物质有时甚至导致其它的干扰，降低检测的敏感性。

其他假阳性可能不是因为所测试的样品，而是因为测试所用的结合伴侣本身，比如要检测同一样品里的抗原和抗体时，如专利申请WO2008/027942中描述的那样。然而，这些结合伴侣相关的干扰与所分析的样品相关的干扰不同，并且用来降低这类干扰的方法与用来降低所分析的样品相关的干扰的方法不同。

因为并非所有的干扰都被消除，实验室有时不得不进行替代分析或额外的测量，以验证他们的诊断测试的结果。因此，减少，甚或是消除实验中的干扰特别重要，特别是当存在假阳性的问题时，因为患者会接受他们并不需要的药物治疗。

申请人证明，对于所有预期，即在用免疫学分析体外检测微生物的存在时，可以用来源自这个微生物特异性的肽，和来源自与所检测微生物不同的微生物显示与所述肽至少50％相同性的其它肽，以消除所测试的样品中的假阳性检测而不降低该测试的敏感性，所述假阳性检测是因为与这些所测试的样品相关的干扰。

事实上，申请人已经证明假阳性和针对于微生物M1的抗体的存在相关，所述微生物M1不同于待测微生物M2，所述微生物M1是造成干扰以及想要中和的检测的原因，其某一种肽显示出与微生物M2的肽在有限长度上的相同性，并且添加相应的特定的属于微生物M1或M2的肽，可以消除假阳性而不损害测试的敏感性。

因此，本发明涉及干扰肽，其特征在于，它们的序列选自：

(i)长度为7至12个氨基酸的肽序列S1，其来源于微生物M1抗原蛋白，和

(ii)长度为7至12个氨基酸的肽序列S2，其来源于与M1不同的微生物M2的靶蛋白的肽序列，

其中所述序列S1和S2相匹配，在其7至12个氨基酸的长度上，它们显示至少50％的相同性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列一端和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差异。