[发明专利]诱导抗原特异性调节性T细胞的方法

说明书

发明领域

本发明涉及获得抗原特异性调节性T细胞的方法及其作为药物治疗病症(如自体免疫疾病、过敏性疾病或移植排斥)的应用。

发明背景

调节性T细胞(Treg)，尤其是表达转录受体Foxp3(叉头框P3)的Treg，是维持正常免疫稳定状态所必需的。在此类细胞不存在时，自体免疫迅速发展，并伴随临床表现例如糖尿病和其它自体免疫疾病(参见Sakaguchi等.(2012)Nature Med.18,54-58)。Foxp3+Treg在胸腺中被主动选择，并且组成周围血液中发现的细胞群，其稳定表达Foxp3。在同种识别由胸腺上皮细胞呈递的自身肽后的胸腺中选择细胞的阈值使得在外周血中发现具有显著亲和性的Foxp3+细胞，这与效应T细胞不同。目前的观点是，外周耐受尤其通过弱亲和性的自身抗原特异性效应细胞与Foxp3+细胞之间的平衡由此提供平衡至耐受来得以维持。除了对Treg的所述中心选择以外，细胞可在外周被转化以表达转录因子Foxp3。然而，表达低于胸腺选择的群，并且观察到获取的表型具有一些可逆性。

天然Treg的性质，如选择自胸腺中并且以高度且稳定地表达Foxp3为特点，使其就作为控制以自体免疫应答为特点的疾病的手段以及保持对移植物或受控过敏原的不需要应答的治疗工具等而言具有吸引力。然而，外周中的抗原特异性天然Treg非常低，并且使其体内甚至体外扩增的方法既不确定又不可靠。一种能够选择性扩增Treg群的方法将有可能防止或抑制疾病进程但不影响器官产生有益应答的整体能力。

凋亡，或程序性细胞死亡，是帮助维持组织稳定状态的生理学机制(参见Fuchs和Steller(2011)Cell 147,742-758)。已经计算在人体中，每分钟有多至10⁶个细胞通过凋亡被损毁。须控制通过细胞死亡而释放的大量抗原，从而避免引发针对自身蛋白质的免疫应答。实际上，凋亡的细胞被清除细胞(主要是未成熟树突细胞)摄取，然后以某种方式被处理以诱导耐受。源自凋亡细胞的抗原的交叉呈递出现在II类主要组织相容性复合体(MHC)中，已知其引发Foxp3+Treg的表达。因此，在炎性状态不存在时发生的细胞凋亡，显示了使调节性T细胞扩增的一种生理学途径。

因此，需要设计一种能够诱导呈递自体抗原或引起不希望的免疫应答(例如，过敏性疾病或移植物排斥)的抗原的细胞凋亡的方法，这之后将产生凋亡体，导致抗原特异性Treg的表达。本领域已知的非特异性免疫抑制治疗法通常易于发生严重感染和其它严重后果，其严重影响生活质量。因此，开发采用抗原特异性Treg来治疗免疫疾病但不产生传统疗法的不利后果的方法是有利的。

WO2008/017517中已经描述了能够引发抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞(cCD4+T细胞)的一般方法。此类细胞在同类识别肽-MHC II类复合体之后诱导抗原呈递细胞的凋亡。不同于且优于现有技术，本发明提供通过诱导抗原呈递细胞凋亡来扩增抗原特异性Foxp3 Treg，所述抗原呈递细胞携带源自移植物释放的同种抗原、自体抗原或免疫原的II类限制性表位。

发明概述

本发明描述引发抗原特异性Foxp3+调节性T细胞的方法。

这些方法包括如下一般步骤：

(a)获得抗原特异性溶细胞性CD4+T细胞；

(b)通过使抗原呈递细胞接触所述溶细胞性CD4+T细胞来诱导所述抗原呈递细胞的凋亡；

(c)由所述抗原呈递细胞的凋亡获得凋亡细胞和凋亡体；和

(d)使所述凋亡细胞或凋亡体与能够呈递来自所述凋亡细胞或凋亡体的抗原的细胞孵育。

cCD4+T(溶细胞性CD4+细胞)细胞可通过主动免疫动物然后采用被覆有表面特异性抗体的磁珠进行亲和纯化来制备获得。通常使CD8+、CD19+、CD127+细胞减少。

或者，体外获得cCD4+T细胞，该方法包括从动物分离原初CD4+T细胞，并在培养中接触包含本文中或WO2008/017517中所述的侧接残基内含硫还原酶(thioreductase)基序的II类限制性表位。或者，可体外获得cCD4+T细胞，该方法包括从动物分离极化的CD4+T细胞，并在培养中接触包含本文中或WO2008/017517中所述的侧接残基内含硫还原酶基序的II类限制性表位。

所述cCD4+T细胞可用于体内诱导抗原呈递细胞的凋亡，该方法包括传递动物中的cCD4+T细胞，该动物主动产生针对由cCD4+T细胞识别的抗原的免疫应答。