[发明专利]一种鳖甲活性多肽提取物的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取物的制备技术领域，具体涉及一种鳖甲活性多肽提取物的制备方法及应用。

背景技术

鳖甲为传统药食两用中药，来源于鳖科动物鳖(Trionyx sinensis Wiegmann)的背甲，始载于《神农本草经》，性味咸，微苦，归肝、肾经，具有滋阴潜阳，软坚散结，退热除蒸的功效；主治阴虚发热，劳热骨蒸、癥瘕，虚风内动等病症。鳖甲及以其为君药的复方制剂临床常用于治疗肝纤维化疾患，具有良好的疗效。鳖甲的化学成分主要有氨基酸、多肽、多糖、微量元素及动物胶、蛋白等。文献报道，体外细胞实验研究显示鳖甲水提液中分子量6KD以下的肽类成分具有显著的抗肝纤维化作用。

鳖甲抗肝纤维化活性多肽提取物的制备，文献已有采用超声提取后用半透膜透析的方法的报道，该方法仅适应于实验室少量制备。

膜分离技术是在20世纪初出现，20世纪60年代后迅速崛起的一门分离新技术。膜分离技术由于兼有分离、浓缩、纯化和精制的功能，又有高效、节能、环保、分子级过滤及过滤过程简单、易于控制等特征，因此，目前已广泛应用于食品、医药、生物、环保、化工等领域，产生了巨大的经济效益和社会效益，已成为当今分离科学中最重要的手段之一。采用多级分离技术，对制备分子量相对较小的物质具有操作简便、分离效率高等优点，工艺过程可实现产业化。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的第一个目的是提供一种鳖甲活性多肽提取物的制备方法，该方法通过水煎煮提取、多级膜过滤、减压浓缩、冷冻干燥等步骤从鳖甲中获得鳖甲活性多肽提取物。

本发明的另一个目的是提供一种上述方法制备的鳖甲活性多肽提取物在制备预防或治疗肝纤维化、酒精性肝损伤的药物或保健食品中的应用。

本发明的第一个目的通过如下技术方案来实现：

一种鳖甲活性多肽提取物的制备方法，步骤如下：

（1）取鳖甲粉碎成粗粉，加水煎煮1-3次，每次加4-12倍重量的水，每次煎煮1-3小时，滤过，合并滤液，得鳖甲提取液；

所述鳖甲为醋鳖甲，最佳加水量是鳖甲粗粉重量的6倍；

所述的煎煮最佳次数为3次，最佳煎煮时间为每次3小时；

（2）将鳖甲提取液用蒸馏水稀释至相当于含鳖甲药材（4-8）g/100mL的浓度，然后用孔径为0.3μm的微滤膜过滤，得微滤液；

所述鳖甲提取液稀释后的最佳浓度为相当于含鳖甲药材6g/100mL；

（3）微滤液用截留分子量为15KD-25KD的超滤膜在0.15-0.3Mpa压力下进行第一次超滤，收集透过液，弃去截留液；

（4）将步骤（3）所得透过液用截留分子量为6KD-10KD的超滤膜在0.5-1.5Mpa压力下进行第二次超滤，分别收集透过液和截留液；

（5）向步骤（4）收集的截留液中加入3-5倍体积的蒸馏水稀释，所得稀释液用截留分子量为6KD-10KD的超滤膜在0.5-1.5Mpa压力下进行第三次超滤，收集透过液，弃去截留液；

（6）合并步骤（4）和（5）所得的透过液，经减压浓缩，冷冻干燥，即得鳖甲活性多肽提取物。得到的鳖甲活性多肽提取物中分子量小于6KD的物质的含量为85.3-98.5%，总多肽含量为46.3-64.1%。

微滤液依次采用截留分子量为15KD-25KD与6KD-10KD两个分子量段超滤膜进行超滤的最佳组合为20KD和8KD。

根据上述制备方法得到的鳖甲活性多肽提取物，可用于制备预防或治疗肝纤维化、酒精性肝损伤的药物或保健食品。

本说明书中所记载的百分含量均为质量百分含量。

与现有技术相比，本发明的优点和有益效果在于：

鳖甲抗肝纤维化活性多肽提取物的制备，文献已有采用超声提取后用半透膜透析的方法的报道。该方法系采用常压透析，所耗费时间长，仅适用于实验室少量制备。

鳖甲提取液中含有大量大分子的蛋白等物质，若直接选择所需截留分子量的超滤膜，则大分子蛋白易沉积在膜表面，阻塞膜孔，增加扩散阻力，造成通量下降，产品收得率低。本发明采用多级膜分离技术，提取液先用微滤膜过滤，除去大分子蛋白，再用截留分子量为15KD-25KD的超滤膜超滤，最后用截留分子量为6KD-10KD的超滤膜超滤两次，具有操作简便、分离效率高、超滤膜重复使用率高进而降低生产成本、无环境污染、制备工艺可进行产业化等优点，符合中药现代化的要求。