[发明专利]牛奶中氟喹诺酮类药物的MALDI-TOF-MS检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛奶中氟喹诺酮类药物的检测方法，具体地说，涉及一种牛奶中氟喹诺酮类药物的MALDI-TOF-MS检测方法，属于食品安全检测技术领域。

背景技术

近年来，基质辅助激光吸附电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术广泛应用于多肽和蛋白质分子量的测定及纯度评价,如牛碳酸酐酶、蜂毒素、牛胰岛素、牛胰岛素B链、短杆菌肽S、肌红蛋白、细胞色素C、胰蛋白酶原等，测定过程十分简便，在国内外的一些实验室MALDI-TOF-MS已成为蛋白质分子量测定的常规方法。在多肽、氨基酸质谱分析方面，大多采用DHB、CHCA作为MALDI基质。

目前，MALDI-TOF-MS多用于大分子物质的分析，但是实际待测物的组成中经常也包含有小分子物质，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在分子量小于400u区域内，由于基质本身的电离，使小分子化合物质谱图中存在大量难以解释的杂峰。大量杂峰的存在产生了很强的质量歧视效应，使那些不易电离的小分子化合物很难解吸电离出分子离子。

氟喹诺酮类药物残留通常采用酶联免疫吸附法或液质联用法检测，以上检测方法的前处理过程是整个氟喹诺酮类药物残留检测过程中最耗时耗力、最繁琐的一个环节，同时又是对检测结果影响最大的环节。目前，还没有见到采用MALDI-TOF-MS来检测氟喹诺酮类药物残留的研究报道。

发明内容

   本发明要解决的问题是针对以上不足，提供一种牛奶中氟喹诺酮类药物的MALDI-TOF-MS检测方法，可以快速筛选牛奶中残留的氟喹诺酮类药物，采用本发明所述的检测方法，前处理过程简单，检测效率高。

为解决以上问题，本发明采用的技术方案为：牛奶中氟喹诺酮类药物的MALDI-TOF-MS检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

8-羟基喹啉功能化介孔分子筛，得到SBA-15-8羟基喹啉；

制备MALDI-TOF-MS样品：

将牛奶用三氟乙酸稀释，得到样品目标物；

将SBA-15-8羟基喹啉分散在乙醇溶液中并进行超声处理，得悬浮液；

取悬浮液加入样品目标物，室温下自然干燥后得到MALDI基质薄层；

取待测牛奶并置于MALDI基质薄层上，溶剂自然蒸发后进行MALDI-TOF-MS分析。

一种优化方案，所述制备MALDI-TOF-MS样品步骤包括：

取10μL牛奶以体积比1：100用0.1%的三氟乙酸稀释，得到样品目标物；取1mg的SBA-15-8羟基喹啉分散在1mL乙醇溶液中并进行超声处理，时间为3min，得悬浮液；

取1μL悬浮液加入样品目标物，即用三氟乙酸稀释后的牛奶上，室温放置5-10min，自然干燥后得到MALDI基质薄层；

量取0.5μL待测牛奶并置于MALDI基质薄层上，放置5-10min，溶剂自然蒸发后，将基质薄层通过MALDI-TOF-MS进行分析。

另一种优化方案，所述8-羟基喹啉功能化介孔分子筛步骤包括：

将介孔分子筛SBA-15置于马弗炉中烘烤干燥；

取干燥后的介孔分子筛SBA-15置于混有8羟基喹啉的甲苯溶液中，搅拌，然后将温度在10分钟内升至120℃并保持，再进行过滤，清洗过滤后得到的固体，在真空下干燥，得到SBA-15-8羟基喹啉。

再一种优化方案，MALDI-TOF-MS分析后得待测牛奶的质谱图，与纯牛奶的质谱图进行对比，判断待测牛奶中是否含有氟奎诺酮药物。

本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：将样品和基质混合点于靶板之上，直接进入基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行测定，省去了繁琐的前处理过程。当牛奶中氟喹诺酮类药物残留量超过0.05mg/kg时，可以有效地检测到25种氟喹诺酮类药物残留中的18种。利用8-羟基喹啉功能化的介孔分子筛材料SBA-15为基质，建立用MALDI-TOF-MS对牛奶中的25种氟喹诺酮类药物进行快速筛选的方法，可大大提高检测效率，以适应进出口产品的快验快放要求。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

附图说明

附图1为本发明实施例中以CHCA为基质添加浓度为200mg/kg的麻保沙星的MALDI质谱图；

附图2为本发明实施例中以DHB为基质添加浓度为200mg/kg的麻保沙星的MALDI质谱图；