[发明专利]一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法

说明书

技术领域

本发明属于药用菌栽培技术领域，具体涉及一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，尤其涉及一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体黄粉虫上经人工培育而成人工虫草的培育方法。

背景技术

随着人们生活水平的提高和对健康的重视，冬虫夏草及其附属产品成为一个发展迅速的产业。冬虫夏草列为国家二级保护物种，各地政府也出台政策禁挖、限挖，但对冬虫夏草的采挖并未得到遏制。冬虫夏草是我国的一种名贵中药，由于它需要特殊的生长条件，生长期较长，因而在自然界中数量十分稀少，随着环境条件的改变，产量呈逐渐下降趋势，而社会需求越来越大，故十分名贵，价格也不菲，目前市场上达到每千克4万元左右。

虫草(Cordyceps militaris)与冬虫夏草(Cordyceps)比较：虫草是名贵的中药材，具有很高的滋补保健价值和药用价值。在我国虫草的种类有200多种，其中应用价值最高的是产于西藏的冬虫夏草和产于长白山的虫草。二者在生物分类上同属于子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属。冬虫夏草产自天然，是冬虫夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫而形成。黄粉虫虫草是将虫草菌接种于黄粉虫体，经人工培育而成。目前黄粉虫虫草的栽培己经形成规模化。黄粉虫虫草和冬虫夏草药化成分及药理功能都非常相近。研究表明，黄粉虫虫草和冬虫夏草中无机元素种类基本一致，二者硒的含量均较高，分别比富硒抗癌中药黄茂高3.3倍和5.8倍。

目前，国内北华大学的潘丽梅将黄粉虫幼虫通过接种虫草菌，在一定的温度、湿度、光照等条件下，经过数天的精心培育，成功培育出了黄粉虫虫草，但感染率近为30％，达不到大生产的需求。

安徽农业大学微生物防治省重点实验室的李春如教授等人利用台湾虫草(Cordyceps formosana)对饲喂昆虫黄粉虫进行感染试验，结果表明：黄粉虫在菌落接触感染、刚蜕皮幼虫的穿刺接种和孢子浓度1×10⁵个/ml浸蘸处理下，获得了相对较高的侵染率，分别达到30％，25％和25％，刚蜕皮幼虫一般比深色幼虫组其侵染率较高。

申请号为200510101348.0，发明名称为“以黄粉虫为寄主的虫草子实体及其培育方法”的专利，其方法是包括菌种制备、对黄粉虫接种感染和出草等培养步骤。本发明以家黄粉虫为宿主，人工接种虫草菌，模拟虫草自然生态环境，人工培育而成。而此发明的菌种是孢子悬浊液，后期的培养是在自然环境下培养，烘干处理采用高温处理，这对虫草的质量和有效成分的影响很大。

发明内容

本发明的目的是提供一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株孢子接种到活体黄粉虫上人工培育而成人工虫草的培育方法。

为实现上述目的，本发明一种人工虫草的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)虫草菌菌株的筛选

将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于黄粉虫粉末作为氮源的培养基平板上，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；

2)黄粉虫的准备

在无菌操作台内，将10-15龄黄粉虫幼虫用75％酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，置于无菌的容易内通风晾干，作宿主备用；

3)菌悬液的制作

将筛选的虫草菌株接种于以黄粉虫粉末作为主要氮源制成的液体培养基中，置20℃下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4-5天，用高速离散器，以10000r/min，匀浆1min既得菌悬液；

4)接种

在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述黄粉虫尾部或口器，按0.1-0.15毫升/只注入菌液；

5)子座的培育

将处理后的黄粉虫放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23℃下保护至体僵硬；然后将培养僵硬的体置于15-25℃、空气相对湿度为85-95％的自然光照的无菌培养室中培养；

6)虫草的收集保存

子座成熟后，放在60℃环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。

本发明虫草以黄粉虫为宿主，人工接种菌悬液。接种成功率、接种后的僵化率达85％以上，子实体的长出率达100％以上。从接种到子实体的成熟约50-60天。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：

本发明中的活体黄粉虫为本公司实验室自主提供。