[发明专利]人血清中三种极长链脂肪酸的气相色谱-质谱检测方法

权利要求书

1.一种人血清中三种极长链脂肪酸的气相色谱-质谱检测方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）、人血清样品前处理得到衍生化产物，包括：

在人血清中加入十七烷酸和二十七烷酸的混合内标溶液，再加入盐酸-乙腈溶液，充分混匀后在设定为80～120℃的烘箱中酸水解；

将酸水解后的溶液静置冷却至室温，加入氢氧化钠-甲醇水溶液，充分混匀后在设定为80～120℃的烘箱中碱水解；

将碱水解后的溶液静置冷却至室温，加入正己烷萃取甾醇类杂质，弃除上层溶液，加入盐酸至溶液的pH值显酸性；

加入正己烷并充分混匀，离心后取出上层溶液用氮气吹干，在残渣中加入衍生化试剂，置于70～90℃的烘箱中进行衍生化反应得到衍生化产物；

（2）、对所述衍生化产物用气相色谱-质谱仪进行检测；

其中，气相色谱条件包括：

色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；

载气：氦气，99.999%；

载气流速：1.0mL/min；

进样方式：不分流进样；

进样体积：1μL；

进样口温度：300℃；

Post Run Temp：320℃；

Post Run Time：3min；

其中，质谱条件包括：

电离源：电子轰击离子源，70ev；

传输线温度：310℃；

离子源温度：280℃；

四极杆质量分析器温度：150℃；

溶剂延迟时间：6min；

扫描模式：全扫描和选择离子扫描，全扫描范围为m/z73.00-500.00；

（3）、根据所述衍生化产物的总离子流色谱图和质谱图对所述人血清样品中各极长链脂肪酸进行定性分析，根据选择离子色谱图计算所述人血清样品中各极长链脂肪酸的含量，所述极长链脂肪酸包括二十二烷酸、二十四烷酸和二十六烷酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酸水解的时间为40～60min，所述碱水解的时间为40～60min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人血清样品与所述盐酸-乙腈溶液的体积比为（1:20）～（1:40），所述人血清样品与所述氢氧化钠-甲醇水溶液的体积比为（1:20）～（1:40）；

所述将碱水解后的溶液静置冷却至室温，加入正己烷萃取甾醇类杂质，弃除上层溶液，加入盐酸至溶液的pH值显酸性的步骤中，所述正己烷与所述人血清样品的体积比为（40:1）～（60:1），所述盐酸与所述人血清样品的体积比为（5:1）～（10:1）；

所述加入正己烷并充分混匀，离心后取出上层溶液进行萃取的步骤中，所述正己烷与所述人血清样品的体积比为（40:1）～（100:1）。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述十七烷酸和二十七烷酸的混合内标溶液包括十七烷酸和二十七烷酸，其中，所述十七烷酸和二十七烷酸的质量比为（8:1）～（15:1）。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂包括双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷，所述双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺与所述三甲基氯硅烷的比例为99:1。