[发明专利]一种达比加群中有关物质的HPLC测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种达比加群及含达比加群的相关制剂的有关物质检测方法，属于药物分析检测领域。 

背景技术

达比加群酯是直接凝血酶抑制剂，具有可以口服、强效、无需特殊用药监测、药物相互作用少等特点。体外、体内试验和临床各项研究均提示达比加群酯具有良好的疗效及药动学特性，临床应用前景乐观，其成功上市是抗凝血药物研究领域的一项重大突破。由于达比加群酯在合成过程中有可能引入残留原料及其它有关物质，在储藏过程中还有可能产生降解产物，本法有效的对解离后的达比加群进行纯度分析，本试验采用普通的色谱柱（C₁₈色谱柱）快速准确的实现了达比加群有关物质的测定，保证了达比加群的质量可控，在合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。目前尚未检索到达比加群有关物质的HPLC的测定方法。本发明达比加群及含达比加群的相关制剂的有关物质检测方法，可快速准确的检测出达比加群的杂质及降解产物情况。操作简捷，灵敏度高，可较好地控制产品质量。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用二极管阵列检测器对达比加群及含达比加群的相关制剂进行有关物质检查的测定方法。 

   本发明有关物质检查方法的实现包括以下步骤： 

（1）色谱条件：检测器采用二极管阵列检测器，柱温30℃，流速1.0ml/min。色谱条件的流动相由乙腈（流动相A ）- 磷酸盐溶液（流动相B ）组成，其中磷酸盐溶液（流动相B ），浓度范围0.005～0.015mol/L，调整pH范围6.5～8.5，其最佳浓度为0.01mol/L，最佳pH值为7.6左右。色谱柱温度为30℃，流速1.0ml/min。理论塔板数按达比加群峰计算不低于3000。

（2）供试品溶液的制备： 

   取达比加群或含达比加群的相关制剂适量，加流动相配制成0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液。

（3）对照溶液的制备： 

  量取上述（2）供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。

（4）测定方法： 

  取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20%，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至达比加群主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积（见附图1、附图2）。

  本发明达比加群及含达比加群的相关制剂的有关物质检测方法，上述（2）中供试品溶液的制备：为满足供试品溶液检测浓度的需要，取达比加群适量，用流动相配制成浓度为每1ml含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.5ng（S/N≥3），若以有关物质检查时的浓度0.5mg/ml计算，其检出限度为0.1%。 

  本发明达比加群及含达比加群的相关制剂的有关物质检测方法，上述（3）中对照溶液的制备：精密量取上述供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。当该对照溶液浓度范围在1～8μg/ml内时，峰面积与浓度呈良好的线性关系，其线性相关系数为0.9997（见附图3）。 

  本发明达比加群及含达比加群的相关制剂的有关物质检测方法，其有关物质检测高效液相色谱图中，如有杂质峰出现，量取各杂质峰面积的和，应不得大于对照溶液的主峰面积（1%）。 

本发明达比加群及含达比加群的相关制剂的有关物质检测方法，适用于各种需要进行有关物质检测的达比加群及含达比加群的相关制剂，如达比加群酯片。 

  本发明与已有技术相比的积极效果在于： 

 1、本发明使用二极管阵列检测器对本品进行有关物质检测，建立了一种快速直观的评价色谱峰纯度的有效方法: 可直观的判断色谱峰的纯度, 并判断存在干扰峰的位置, 能够获得“在流”的全部光谱信息, 快速得到色谱组分的吸收光谱, 二极管阵列检测器较一般的紫外-可见检测器, 优点在于不仅能依靠色谱的保留时间进行定性, 而且能够根据其提供的光谱信息进行定性, 大大提高了定性的可信度。并有效提高了其检测灵敏度。

2、本发明达比加群及含达比加群的相关制剂的有关物质检测方法，可快速准确的检测出达比加群的杂质及降解产物情况。可较好地控制产品质量。 

3、本发明适用于各种剂型的达比加群及含达比加群的相关制剂，如达比加群片。