[发明专利]一种草菇菌株0229分子特异性检测标记及其检测方法

权利要求书

1.一种草菇菌株0229分子特异性检测标记，其特征在于：所述特异性检测标记为特异性引物，其中引物序列为：

F：CTTTCAGGAAGAGCCCAGC；

R：TGAAGGGCTTGAAGGAGAAA。

2.一种草菇菌株0229分子特异性检测方法，包括：

(1)将草菇菌株接种PDA平板培养基，32℃培养5d，将表面菌丝装入无菌管中，-70℃保存，然后用改进的CTAB法提取基因组DNA，得到DNA；

(2)将上述DNA为模板，特异性检测标记引物为扩增引物，进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，进行电泳检测，其中特异性检测标记引物为F：CTTTCAGGAAGAGCCCAGC；R：TGAAGGGCTTGAAGGAGAAA；草菇菌株0229能在分子量200bp-300bp之间扩增出2条特异条带，其它草菇菌株不能在相同位置同时扩增出这2条条带。

3.根据权利要求2所述的一种草菇菌株0229分子特异性检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR扩增体系为：总体积为25μL，其中10×PCR buffer II(Mg²⁺Plus)2.5μL，2.5mM dNTP各2uL，5U/μL ExTaq DNA酶0.25μL，10μmol/L特异性引物对各0.5μL，50ng/μL模板DNA 0.5μL，ddH₂O 18.75μL。

4.根据权利要求2所述的一种草菇菌株0229分子特异性检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃补平10min。

5.根据权利要求2所述的一种草菇菌株0229分子特异性检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中电泳检测方法为：取PCR扩增产物20μL，与12μL加样缓冲液混匀，于95℃变性5分钟，结束后置于冰水混合物中冷却3分钟，点样3μL与6％变性聚丙烯酰胺上电泳，电泳缓冲液为1×TBE，电压1000V，电流200mA，功率200W，电泳45分钟，银染，显色，然后在凝胶成像仪上拍照。