[发明专利]一种快速检测虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：该试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维膜、吸收垫、PVC板组成，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次固定在PVC板上；其特征在于所述结合垫是无纺布结合垫，其中喷涂有免疫胶体金颗粒的抗虾蟹螺原体多克隆抗体，可与样品中的虾蟹螺原体发生抗原-抗体特异性结合；所述硝酸纤维素膜包括包被有抗虾蟹螺原体多克隆抗体的检测线和包被有羊抗兔IgG抗体的质控线。

2.一种制备权利要求1所述的虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)虾蟹螺原体多克隆抗体制备及测定：采用经甲醛灭活后的螺原体全菌作为免疫抗原，经4次人工免疫健康的新西兰大白兔，抽血进行效价测定，分离高效价螺原体多克隆抗体并进行纯化；

(2)纳米胶体金颗粒的制备：采用柠檬酸三钠作为还原剂制备40～50nm胶体金溶液，并调整胶体金溶液的pH至8，备用；

(3)制备抗虾蟹螺原体多克隆抗体的胶体金结合标记物：在电磁搅拌器下将抗虾蟹螺原体多克隆抗体缓慢加入备用的胶体金溶液中，虾蟹螺原体多克隆抗体的质量和胶体金溶液的体积比为0.015：1，经纯化和浓缩后形成胶体金结合标记的虾蟹螺原体多克隆抗体；

(4)结合垫的制备：结合垫上喷涂的胶体金结合标记的虾蟹多克隆抗体的浓度为15ug/ml，喷涂量为30ul/cm²；

(5)抗体固相硝酸纤维素膜的制备：将抗虾蟹螺原体多克隆抗体包被到硝酸纤维素膜上的检测线位置作为检测线捕获抗体，浓度为1.2mg/ml，包被参数为1μl/cm，抗结合抗体的羊抗兔IgG二抗喷涂到硝酸纤维素膜上的质控线位置作为质控线捕获抗体，浓度为1.2mg/ml，包被参数为1μl/cm；

(6)将吸收垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、PVC板组装成胶体金免疫层析检测试纸条。

3.根据权利要求2所述的虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于所述（1）步骤虾蟹螺原体多克隆抗体效价分别为1∶16384和1∶65536，用Protein A亲和层析柱纯化多克隆抗体，用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定抗体浓度并调整为2mg/mL。

4.根据权利要求3所述的虾蟹螺原体胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于所述（5）步骤检测线与控制线之间的间隔为5.0mm。