[发明专利]发酵生产9-OH-AD的耻垢分枝杆菌、菌剂、制备方法和应用

权利要求书

1.一种发酵生产9-OH-AD的耻垢分枝杆菌，其特征是，所述耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis）保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2013544。

2.一种含权利要求1所述耻垢分枝杆菌的液体菌剂，其特征在于，所述液体菌剂中，所述耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis）的菌体浓度达到10亿个/ml以上。

3.一种根据权利要求2所述的耻垢分枝杆菌的液体菌剂的制备方法，其特征是，

（1）斜面种子培养：将耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis）CCTCC NO:M2013544接种于斜面种子培养基，28～32℃培养；

（2）一级种子培养：把上述斜面种子培养的菌落加入液体种子培养基中培养，温度为28～32℃；

（3）二级种子培养：一级种子培养后的菌液接种到液体种子培养基中，接种量为9～11%，温度为28～32℃，得液体菌剂。

4.根据权利要求3所述的耻垢分枝杆菌的液体菌剂的制备方法，其特征是，所述斜面种子培养基配方为，玉米浆9～11g/L、硫酸铵1.3～1.7g/L、磷酸二氢钾0.45～0.55g/L、磷酸氢二钾0.5～0.6g/L、蔗糖0.45～0.55g/L、七水硫酸镁0.18～0.22g/L、七水硫酸亚铁0.004～0.006g/L、七水硫酸锌0.001～0.003g/L、琼脂18～22g/L，调节pH值为7.1～7.2。

5.根据权利要求3所述的耻垢分枝杆菌的液体菌剂的制备方法，其特征是，液体种子培养基配方为，玉米浆9～11g/L、硫酸铵1.3～1.7g/L、磷酸二氢钾0.45～0.55g/L、磷酸氢二钾0.5～0.6g/L、蔗糖9～11g/L、七水硫酸镁0.18～0.22g/L、七水硫酸亚铁0.004～0.006g/L、七水硫酸锌0.001～0.003g/L，调节pH值为7.1～7.2。

6.一种如权利要求2所述耻垢分枝杆菌的液体菌剂在发酵生产9-OH-AD中的应用，其特征是，将合格的液体菌剂接种到转化培养基中，接种量为9～11%，转化温度为28～32℃，转化完全后，离心，离心后的发酵液用氯仿提取，浓缩，冷却，抽滤，滤饼层用甲醇冲洗，得9-OH-AD。

7.如权利要求6所述耻垢分枝杆菌的液体菌剂在发酵生产9-OH-AD中的应用，其特征是，所述转化培养基重量配方为，磷酸二氢钾0.07～0.09%，三水磷酸氢二钾0.4～0.5%，磷酸氢二铵0.2～0.4%，葡萄糖0.45～0.55%，β-环糊精6～7%，植物甾醇1.8～2.2%，质量浓度为20-40%的有机硅消泡剂0.045～0.055%，微量营养物3～5%，pH为7～9，所述微量营养物的成分为七水硫酸镁0.8～1.2%，七水硫酸铁0.45～0.55%，七水硫酸锌0.08～0.12%，质量浓度为20～40%的硫酸0.05%，其余为水。

8.如权利要求6所述耻垢分枝杆菌的液体菌剂在发酵生产9-OH-AD中的应用，其特征是，发酵培养的转速为400～600rpm，空气流量为0.18～0.22Nm3/h，罐压0.045～0.055MPa。