[发明专利]一株对桑白粉菌分生孢子具有捕食作用的真菌

说明书

技术领域

    本发明属于植物病害生物防治领域，具体涉及一株对桑白粉菌分生孢子具有捕食作用的真菌pseudozyma aphidis CNm2012。

背景技术

 桑树是一种重要的经济作物，除了其叶可以用作饲养家蚕外，其果实可食用，以及用于提取花青素，其根、茎也可入药。桑白粉病是由子囊菌亚门核菌纲白粉菌目白粉菌科球针壳属真菌引起的一种桑树病害，受害桑叶因营养价值差，品质低劣，因而食用它的蚕体质变弱，容易诱发蚕病，导致蚕的茧量和茧层量少。桑白粉病的爆发对整个蚕桑行业造成巨大的经济损失，因此如何防治桑白粉病成了蚕桑产业关注的焦点。长期以来为了防治桑白粉病，大量使用化学药剂，不仅导致药物残留，还导致了耐药病原菌株的产生。因此寻找新的防治白粉病的方法具有十分重要的意义。生物防治方法是近年来研究的热点，生物防治主要是利用拮抗，竞争，或捕食（寄生或腐生）作用防治病原菌，但目前利用微生物制剂来防治桑树病害国内外尚未见相关研究报道。

发明内容

为了减少化学农药的使用对环境的污染及生物安全的影响，本发明提供一株对桑白粉菌分生孢子具有捕食作用的真菌pseudozyma aphidis CNm2012，通过捕食桑白粉菌分生孢子的作用形式来防治桑树白粉病。

本发明所述的菌株从桑树叶片表面分离，该菌株已于2013年11月10日保藏在湖北省武汉市武汉大学（邮编：430072，电话：027-68754052）中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，菌株保藏号为CCTCC NO：M 2013563。

菌株接种于土豆固体培养基中，28℃培养4天，培养基上出现中间平滑似酵母，边缘长出菌丝的粉红色菌落，显微观察，菌体梭状，大小不一，菌体中央有油滴状物质，随着生长长出长短不一的菌丝。菌株18SrDNA序列1416bp，序列号为KF443200；28SrDNA序列627bp，序列号为KF443201；ITSrDNA序列784bp，序列号为KF443199。根据形态学和分子生物学特征，菌株被鉴定为pseudozyma aphidis ，菌株号CNm2012。

本发明所述的pseudozyma aphidis CNm2012的分离、纯化和保种方法是，将发现对桑白粉菌分生孢子有捕食作用的菌株涂布到含有青链霉素的土豆培养基上培养，挑取培养物在纯化培养基上纯化培养，培养条件：20-30℃，PH 6.5-7.5，然后纯化菌株转接到斜面进行保种。

本发明以捕食作用的方式来防治桑白粉病，试验表明菌株pseudozyma aphidis CNm2012对桑树及家蚕没有致病性。

附图说明：

图1、pseudozyma aphidis CNm2012菌体的形态特征

     28℃，在180r/min的转速下于萨氏液体培养基中摇床培养7天的pseudozyma aphidis CNm2012菌体的显微结构图，刻度标尺为20 μm。

图2、pseudozyma aphidis CNm2012菌株基于ITS rDNA的系统进化分析树

选取pseudozyma属的14个种的ITS rDNA序列进行比对，依据临近法构建系统发育进化树，括弧内为菌株ITS rDNA序列的序列号。

图3、Pseudozyma aphidis CNm2012菌株对桑白粉菌分生孢子的捕食作用

     利用倒置显微镜对CNm2012菌株与桑白粉菌孢子混合液进行每小时跟踪拍摄所得的显微图，刻度标尺为20μm。

图4、以桑白粉菌为营养的pseudozyma aphidis CNm2012菌株的生长曲线图

     用CNm2012菌株与不同浓度的桑白粉菌分生孢子共同培养，每隔12小时取样检验其OD600的吸光值（每组皆以各自浓度的桑白粉菌分生孢子悬液作为空白对照）。

图5、田间试验防治效果显微镜观察

在桑叶感染桑白粉菌早期以CNm2012菌株处理过的桑叶和对照桑叶在一周之后的表面显微形态，A是CNm2012菌株处理过的桑叶表面，B是对照桑叶表面，刻度标尺为100μm。