[发明专利]犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试纸条及制备方法，具体涉及一种犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条及制备方法。

背景技术

犬细小病毒（Canine Parvovirus,CPV）是细小病毒属成员，单链小DNA病毒。病毒粒子为等轴对称的二十面体，外观呈圆形或六边形，无囊膜，病毒颗粒直径为21nm～24nm，沉降系数为23S～27S。在1977年，首次从患有肠炎的病犬体内分离获得CPV，病犬以呕吐、出血性肠炎、白细胞减少为主要特征，幼犬的易感性高，可引起幼犬的心肌炎；为了与犬极小病毒（MCV）相区别而命名为CPV-2，随后在许多国家和地区的犬科动物中相继被发现，发病率为50%～100%，死亡率为0%～50%，对养犬业和经济动物养殖业危害极大，并且也影响到了野生动物的生存，因此要建立快速有效的检测方法，并针对该病进行有效治疗。

我国已建立的用于检测CPV抗体的血清学方法有血凝试验、血凝抑制试验、琼脂扩散试验等，但是由于CPV与猫泛白细胞减少症病毒、水貂肠炎病毒三者之间能发生交叉血清学反应，因此在实际应用中这些方法常受到限制。酶联免疫吸附试验（ELISA）可检测CPV抗原，也可检测CPV抗体；PCR检测敏感性高，特异性强，可分辨野毒感染和疫苗免疫，但这两种技术都需要特殊的仪器设备。利用胶体金标记单克隆CPV表面抗体，制成检测CPV抗原的胶体金检测试纸条敏感性高，特异性强，稳定性好，操作简便快速，结果易于分析判定。王中力等，在中国预防兽医学报上发表的文章《犬细小病毒免疫胶体金诊断技术的研究》中提到的方法是标记抗犬细小病毒单克隆抗体，包被抗犬细小病毒兔多抗。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条，为快速检测犬细小病毒，为临床诊断提供可靠依据。该检测试纸条采用胶体金标记的抗犬细小病毒单克隆抗体F1做探针，包被抗犬细小病毒单克隆抗体B6和羊抗小鼠IgG的双抗体夹心法检测犬细小病毒，可供犬科动物及犬细小病毒易感动物的犬细小病毒检测。

本发明的另一目的在于提供上述犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条，包括样品吸收区、金标探针区、固相化抗体区、吸水区和底板，样品吸收区、金标探针区、固相化抗体区和吸水区依次铺设在底板上并相互部分重叠；金标探针区包被有胶体金标记的抗犬细小病毒单克隆抗体F1，其标记量优选为1～10μg/mL（每mL胶体金标记1～10μg抗犬细小病毒单克隆抗体F1）；固相化抗体区（自金标探针区至吸水区方向）依次有检测线和对照线，检测线包被有抗犬细小病毒单克隆抗体B6，包被量优选为0.1～10μg/cm；对照线包被有羊抗小鼠IgG，包被量优选为0.1～10μg/cm。所述的抗犬细小病毒单克隆抗体F1和B6由抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株F1和B6产生；（刘洁等，分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立，中国兽药杂志，2013,47（7）：9-12），其中，抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株F1保藏编号为CCTCC NO：C2013175，抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株B6保藏编号为：CCTCC NO：C2013176。

所述的底板的材料优选为聚乙烯板（PVC板）；所述的样品吸收区的材料优选为玻璃纤维膜；所述的金标探针区的材料优选为聚酯膜；所述的固相化抗体区的材料优选为硝酸纤维素膜；所述的吸水区的材料优选为吸水滤纸。

上述犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：将胶体金标记的抗犬细小病毒单克隆抗体F1喷涂于聚酯膜上；在硝酸纤维素膜上依次包被检测线（包被有抗犬细小病毒单克隆抗体B6）和对照线（包被羊抗小鼠IgG）；将玻璃纤维膜、包被有抗犬细小病毒单克隆抗体F1的聚酯膜、包被有检测线和对照线的硝酸纤维素膜、和吸水滤纸组装到聚乙烯板上得到犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条。

优选的，所述的犬细小病毒胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：