[发明专利]一种犬、猫用免疫球蛋白注射液

说明书

技术领域

本发明涉及应用生物技术制备动物生物制品。

背景技术

动物病毒性传染病发病率与死亡率高达50-100%。疫苗对健康动物传染病的预防是根本，但对临床上一定比例发病群体的治疗至今是一个难题。免疫球蛋白的精制与浓缩在国内外仅限于微量或小型实验阶段，多为单一抗病 毒免疫球蛋白。规范化、产业化浓缩与精制抗多病免疫球蛋白的制作工艺， 在国内外鲜有涉足。人类医学方面曾在破伤风的临床上采用盐析沉淀 法提取精破抗。目前， 国内外浓缩、精制提取免疫球蛋白 （Ig) 主要采用：①离心法；②盐析沉淀法；③分子筛法；④有机物沉淀法，这四种方法均处于小中型试制阶段。

本发明采用犬传染性病毒(犬瘟热病毒、犬副流感病毒、狂犬病毒、犬细小病毒、犬腺Ⅱ型病毒)或猫传染性病毒(猫泛臼细小病毒、口膜炎病毒、 腹膜炎病毒)作为病毒性抗屎，接种单蹄兽动物后，诱导其体液免疫系统产生高效价的抗病免疫球蛋白。通过酶切、盐析、滤过、压干、透析法等生物 技术精制免疫球蛋白。因此，其制备方法较以往的方法要简单、快速、易于掌握，提取回收率理想，经济效益可观，适于专业化制作。

发明内容

本发明在制备方法中提供了以酶切与盐析相结合的新工艺，使单位体积内的效价提高 2 倍，既避免了异源蛋白的变态反应，又减少了提纯过程中免疫 球蛋白的丢失(回收量由原来的  1500g/10000mL  提高到 1800g/10000ml) 。

本发明在制备方法中还提供了对免疫动物的基础免疫与强化免疫的抗原组合比例配方，以及接种时机与采血时机，这对充分利用供浆动物、加大采血次数、减少原料投入有一点的意义。

以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明： 制作免疫球蛋白针剂时，(1)采用制作的犬瘟热、犬细小病毒、犬腺口型病毒和犬副流感病毒细胞培养高效价抗原与改良的佐剂混合乳化后； (2)猫传染性口膜炎、猫传染性腹膜炎、猫细小病毒性肠炎的病毒抗原，人工免疫接种关中大毛驴。第一阶段基础免疫 (6 针)：对检疫合格的关中驴，方可免疫。免疫途径为颈背皮下或肌肉注射，一般注射抗原 6 次，间隔时间为 3-4 天。第一次注射抗原全量的1/4；  第二次注射全量的1/ 3；  第三次注射全量的1/ 3；  第四次

注射全量的 1/2；   第五次注射全量的1/ 2；    第六次注射全量。于第六次注射后14天试血，测定免疫球蛋白效价，供以后强化免疫时参考。

第二阶段强化免疫 (2 针)：第一阶段结束后第七天进入第二阶段。一般注射抗原 2 次(抗原 30 毫升/头·次)，间隔时间为 3-4 天。强化免疫 6-7 天 后试血测效价，之后即可大量采血(采血两次)。采血的毛驴休息半月后，即可进行下程常规高免。

常规高免 (2 针)：一般注射 2 次(抗原 30 毫升/头·次)，每次间隔 9 天(±l 天)。免疫结束的第六天进行第一次采血，隔日进行第二次采血。采 血量为 14-16ml/Kg 体重，第二次采血较第一次减少约1/ 5，均由颈静脉采血。 待采取的血液沉淀形成澄清黄层后，收集吸取血浆。

免疫球蛋白(I g) 的提纯： 将准备提纯的血浆混合于同一容器内，按血浆量 1 ： 2 倍加入蒸馏水，充分搅拌均匀，用 2mol/L 盐酸调整 PH 值为 3.3-3.4. 然后按总量每毫升加入 6-9 个活力的胃蛋白酶和 0.2%的甲苯，搅拌均匀，以水浴加温 30℃±1℃消化 2 小时。消化期间提纯的血浆要不断搅拌。消化完毕后按血浆总量加入15%的 硫酸镑，溶解后用 21N NaOH 溶液调整 pH 值为 5.3-5.4 ，用水浴法加温，以每分钟升l℃为宜，并不断搅拌直至升温至 57-58℃时，再搅拌 30min，静置 30min，完毕后迅速降温冷却至 42℃ 以下时进行下一步工艺处理。

第一次沉淀滤过，将上述液体用滤布在滤槽内过滤，直至清亮，收集滤液，弃去沉淀物。二次沉淀，收集首次沉淀的滤液，用 2N NaOH 榕液调整 PH 值至 7.2-7.3 ，按总量加入21% 的硫酸铵，充分搅拌，溶解后静置30min，后用 25 支纯棉滤布在不锈钢滤槽内过滤，收集沉淀，弃去滤液。

将收集的沉淀压干，称重，装入透析袋内(每袋约装200-250g) ，放置 流水槽内透析 24-72 小时；收集袋内免疫球蛋白，按 180mg/mL 稀释，并加入 0.5%氯仿、0.85%氯化钠和 0.5%硫酸庆大霉素粉，充分搅拌溶解后，用 2N NaOH 溶液矫正 PH 至 6.6-6.7。 置 5-15℃静置沉淀 48 小时，最后以正压形式用直径为 0.3um硝酸纤维微孔滤膜除菌滤过。成品检验合格后，分装出厂。