[发明专利]多肽药物DiaPep277 的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽的合成方法，更具体而言，涉及DiaPep277的合成方法。 

背景技术

以色列安多米达生物技术公司的合成肽——DiaPep277是源自人热休克蛋白60序列上的一段含24个氨基酸的肽段，其序列如下： 

H-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp-OH 

多项临床前试验结果显示，DiaPep277能通过诱导Th2和Treg的产生来抑制致糖尿病免疫反应，从而有效阻止β细胞的破坏，并保留其胰岛素分泌功能，进而有可能改善血糖控制，减少胰岛素用量。更重要的是，DiaPep277的免疫调节作用具有特异性，不会干扰其他免疫功能，因此在临床试验中表现出极佳的安全性。这种药物可以明显提高I型糖尿病患者的生存质量，延缓或阻止各种并发症的发生，以提高患者的预期寿命。目前，FDA已授予DiaPep277孤儿药地位，用于治疗有残余β细胞功能的I型糖尿病患者。 

鉴于DiaPep277在治疗I型糖尿病中的特殊地位和广泛的应用前景，其合成方法的开发也变得日趋紧要。由于DiaPep277肽段中存在大量的疏水残基，会引起树脂收缩严重，如采用标准的固相逐步偶联缩合技术难以顺利偶联，导致纯度很低，特别是偶联片段Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val时容易产生缺损肽及增加或减少Gly的杂质。 

因此，需要开发一种新的合成DiaPep277的方法，其具有改进的纯度和收率。 

发明内容

针对现有技术的不足，本发明通过采用片段固相缩合手段，可有效的避免树脂收缩带来的偶联不完全的缺损肽及增加或减少Gly的杂质，进 而提高DiaPep277粗肽的纯度与收率。 

本发明的目的是提供一种DiaPep277的合成方法，具体提供一种DiaPep277的片段固相合成方法，其包括下述步骤： 

（1）以王树脂或2-CTC树脂为载体合成Fmoc-Asp(OtBu)-树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联氨基酸、然后脱除Fmoc保护基，得到肽树脂A: 

H-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-树脂； 

（2）以2-CTC树脂为载体合成Fmoc-Gly-2-CTC树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联氨基酸，得到肽树脂B:Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-2-CTC树脂； 

（3）将肽树脂B进行裂解，得多肽片段b: 

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-OH； 

（4）将多肽片段b与肽树脂A进行固相偶联得到肽树脂C： 

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-树脂； 

（5）将肽树脂C裂解得到DiaPep277： 

H-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp-OH。 

本发明的DiaPep277的片段固相合成方法相对于传统的固相逐步偶联缩合法不仅保持了操作简便、后处理容易等优点，还具有收率高、纯度好的优势，为DiaPep277的大规模生产提供了一种全新的思路。 

具体实施方式

术语解释 

本文通篇的术语“固相多肽合成方法”、“固相偶联”是指多肽合成领域已知的Fmoc固相合成方法，例如记载于Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach,W.C.Chan,Peter D.White 著，March2,2000（ISBN-10:0199637245）,英国Oxford University Press。