[发明专利]多肽药物DiaPep277 的合成方法

权利要求书

1.一种合成DiaPep277的方法，包括下述步骤：

（1）以王树脂或2-CTC树脂为载体合成Fmoc-Asp(OtBu)-树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联氨基酸、然后脱除Fmoc保护基，得到肽树脂A:

H-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-树脂；

（2）以2-CTC树脂为载体合成Fmoc-Gly-2-CTC树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联氨基酸，得到肽树脂B:Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-2-CTC树脂；

（3）将肽树脂B进行裂解，得多肽片段b:

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-OH；

（4）将多肽片段b与肽树脂A进行固相偶联得到肽树脂C：

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-树脂；

（5）将肽树脂C裂解得到DiaPep277：

H-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp-OH。

2.权利要求1的方法，其中，步骤（1）中的树脂为王树脂；所得的Fmoc-Asp(OtBu)-树脂的替代度为0.4～0.7mmol/g。

3.权利要求1的方法，其中，步骤（2）中所述2-CTC树脂的替代度范围为0.6～1.2mmol/g，优选为0.8～1.0mmol/g。

4.权利要求1的方法，其中，步骤（1）和（2）中的固相多肽合成方法在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为以下成分的组合物：DIPCDI和HOBt；PyBOP、HOBt和DIPEA；TBTU、HOBt和DIPEA；或HBTU、HOBt和DIPEA。

5.权利要求1的方法，其中，步骤（1）和（2）中的固相多肽合成方法在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为DIPCDI和HOBt的组合物，其中各成分的比例以摩尔比计为DIPCDI:HOBT=1:1～1.2。

6.权利要求1的方法，其中，步骤（4）中的固相偶联在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为以下成分的组合物：PyBOP、HOBT和DIPEA；PyBOP和DIPEA；DIPCDI和HOAT；或DIPCDI和HOBT。

7.权利要求1的方法，其中，步骤（4）中的固相偶联在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为PyBOP、HOBT和DIPEA的组合物，其中偶联剂中各成分的比例以摩尔比计为PyBOP：HOBT：DIPEA=1.0:1.2:2.0。

8.权利要求1的方法，其中，步骤（3）中的裂解过程在裂解液的存在下进行，所述裂解液为以体积计为TFE：DCM=1:99的混合物。

9.权利要求1的方法，其中，步骤（5）中的裂解过程在裂解液的存在下进行，所述裂解液为以体积计为TFA：TIS：H₂O=95：5：5的混合物。

10.权利要求1-9中任一项的方法，还包括DiaPep277的纯化步骤，所述纯化步骤采用反相高压液相色谱法，包括：以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.2%三氟乙酸/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。