[发明专利]硼酸亲和整体柱固相微萃取-高效液相色谱在线联用系统

说明书

技术领域

本发明属于分析化学样品前处理领域，具体涉及一种硼酸亲和整体柱固相微萃取-高效液相色谱联用系统、联用方法及其应用，适用于复杂样品中痕量单胺类神经递质的在线预处理、萃取、解吸、分离和检测。

背景技术

单胺类神经递质及其代谢产物在人体的神经、心血管和内分泌等组织系统中起着广泛的调节作用，对情绪、情感、应激行为和睡眠觉醒等生理活动具有重要影响。MNTs含量的变化与人类多种疾病密切相关，是诊断嗜铬细胞瘤、阿尔茨海默氏症、唐氏综合征、抑郁症和帕金森等疾病的重要依据，其含量的准确测定对于疾病诊断与控制、药物开发与研究和神经学基础研究等具有重要意义。

生物样品中单胺类神经递质的含量低，且单胺类神经递质本身荧光响应和质谱响应信号不强，而生物样本基体复杂，内源干扰物质多，因此其分析检测存在极大的困难。选择快速高效的样品前处理方法，是建立高灵敏单胺类神经递质分析方法的关键，也是当前的瓶颈所在。目前单胺类神经递质的样品前处理方法通常以离线的方式进行，具体操作繁琐冗长，人为误差大，影响了分析检测的灵敏度和重现性。在线样品前处理技术不仅可以有效解决离线技术操作耗时的缺点，还可实现大体积进样，极大地提高分析检测的灵敏度，同时自动化操作可减少人为误差，提高分析方法的准确度和精密度。

硼酸亲和材料是利用硼酸基团的特异性反应对顺式二羟基化合物进行分离、富集和纯化的新型材料。由于单胺类神经递质中去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺均含有顺式二羟基结构，因此硼酸亲和材料可以实现对单胺类神经递质的选择性萃取。

整体柱是通过反应试剂原位聚合而得到的棒状整体，具有高容量、良好渗透性和低传质阻力的特点，是在线样品前处理技术中的重要萃取材料之一。硼酸亲和整体柱兼具硼酸亲和材料与整体柱的优点，具有快速、高效和高选择性的特点，可以很好地满足生物样品前处理的要求。目前，尚无以硼酸整体柱为萃取单元，与高效液相色谱联用，在线同时分析四种单胺类神经递质的相关报道。

发明内容

本发明旨在针对生物样品中单胺类神经递质的含量低，且单胺类神经递质本身荧光响应和质谱响应信号不强，而生物样本基体复杂，内源干扰物质多，导致其分析检测存在极大的困难的问题，设计一种硼酸亲和整体柱固相微萃取-高效液相色谱联用系统，结合硼酸亲和整体柱的高选择性、高富集能力，以及高效液相色谱的高分离能力，达到去除生物样品中的杂质，选择性富集痕量单胺类神经递质，最终实现快速、准确定量的目的。

本发明的第二个目的是提供一种硼酸亲和整体柱固相微萃取-高效液相色谱在线分析生物样品中单胺类神经递质的方法。

本发明的第三个目的是提供一种硼酸亲和整体柱固相微萃取-高效液相色谱联用系统在检测生物样品中单胺类神经递质方面的应用。

为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种硼酸亲和整体柱固相微萃取-高效液相色谱在线联用系统，其特征在于，包括固相微萃取单元、第一高压液相泵、第二高压液相泵、高压六通进样阀、高压六通切换阀、定量环、进样针、废液瓶、色谱柱和荧光检测器，所述固相微萃取单元是硼酸亲和整体柱，所述硼酸亲和整体柱的一端与高压六通进样阀连接，另一端与高压六通切换阀连接；第一高压液相泵的输出端与高压六通进样阀连接，定量环的两端连接于高压六通进样阀上；所述废液瓶与高压六通切换阀连接，第二高压液相泵的输出端与高压六通切换阀连接，色谱柱的一端与高压六通切换阀连接，另一端连接于荧光检测器；所述的高压六通进样阀和所述高压六通切换阀都包括两个状态，分别是载样档和进样档，当所述高压六通进样阀位于进样档状态时，所述第一高压液相泵、定量环与所述硼酸亲和整体柱相连通；当所述高压六通进样阀位于载样档状态时，所述定量环与所述硼酸亲和整体柱相隔离，所述第一高压液相泵与所述硼酸亲和整体柱相连通；当所述高压六通切换阀位于进样档状态时，所述硼酸亲和整体柱与所述的色谱柱相连通；当所述高压六通切换阀位于载样档状态时，所述硼酸亲和整体柱与所述的色谱柱相隔离，所述第二高压液相泵与所述色谱柱相连通。

进一步地，所述硼酸亲和整体柱由以下步骤的制备方法得到：第一，将不锈钢毛细柱浸泡于盐酸溶液中1小时后，用超纯水清洗，干燥备用；第二，将正丙醇和1,4-丁二醇混合作为溶剂和致孔剂，然后加入4-乙烯基苯硼酸、甲叉双丙烯酰胺和偶氮二异丁腈，超声脱气，通氮气除氧，最后将混合溶液注入经第一步处理后的不锈钢毛细管柱，用硅橡胶堵住毛细管柱两端后进行热引发聚合反应；第三，将第二步合成的硼酸亲和整体柱连接到一个高压液相泵上，用甲醇冲洗整体柱，除去致孔剂和未反应溶剂。