[发明专利]原油环境样品中石油微生物的DNA提取方法

权利要求书

1.一种原油环境样品中石油微生物的DNA提取方法，其特征在于按下述方法进行：第一步，在离心管中加入10微升至50微升原油，然后在盛有原油的离心管中加入100微升清洗缓冲液混合均匀得到混合液；第二步，将盛有混合液的离心管放置在细胞破碎仪中破碎40秒至60秒，然后在转速为12000转/分钟至16000转/分钟的离心机中离心10分钟至15分钟，去除上清液得到固相；第三步，在固相中加入200微升至300微升萃取清洗液，然后加入30微升至50微升的溶菌酶并混合均匀，在温度为37℃下水浴5小时至10小时；第四步，对水浴后的溶液用细菌DNA提取试剂盒进行提取，得到原油环境样品中石油微生物的DNA。

2.根据权利要求1所述的原油环境样品中石油微生物的DNA提取方法，其特征在于清洗缓冲液按下述方法得到，按10g Na₂HPO₄配1g KH₂HPO₄、50g NaCl和1.5g KCl计，在Na₂HPO₄中加入KH₂HPO₄、NaCl和KCl配成溶液，在溶液中加入百分之一的溶液体积的十二烷基硫酸钠混合均匀得到贮存液，调节贮存液的pH为7.5，然后加入贮存液10倍体积的蒸馏水混合均匀，得到清洗缓冲液。

3.根据权利要求1或2所述的原油环境样品中石油微生物的DNA提取方法，其特征在于萃取清洗液按下述方法得到，将氯仿和异戊醇按体积比为24：1混合在一起，得到萃取清洗液。

4.根据权利要求1或2所述的原油环境样品中石油微生物的DNA提取方法，其特征在于离心管为1.5毫升的离心管。

5.根据权利要求3所述的原油环境样品中石油微生物的DNA提取方法，其特征在于离心管为1.5毫升的离心管。