[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其在畜禽养殖中的应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物筛选及应用技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌WL-04菌株及其作为饲料添加剂的应用。

背景技术

如今，规模化和集约化养殖发展迅速，随之出现了饲养密度过大、养殖舍环境通风不良等一些养殖环境质量下降的问题，由条件性致病细菌引起的各种畜禽消化道疾病对养殖的困扰也越来越突出，如大肠杆菌病、沙门氏菌病、产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎等。为达到防治疾病或促进动物生长的目的，大量抗生素被应用于畜禽生产的多个环节。抗生素的长期使用和滥用带来许多负面作用和严重后果，如畜禽免疫低下、细菌耐药性、药残超标等问题，特别是一些致病菌为人畜共患病类型，如若产生超强耐药性的超级细菌，将会带来严重的公共卫生安全问题。因此，养殖生产上少用或禁用抗生素已成了社会共识。

经过多年的技术开发和积累，益生菌微生态制剂成为替代抗生素的首选。微生态制剂自身分泌多种物质，拮抗病原微生物的生长，调节动物免疫，无耐药性、无残留，深受人们欢迎。其中芽孢杆菌更是使用最为广泛的一种微生态制剂。

但是，不同芽孢杆菌菌株的益生性能差异较大。目前，研究较多的是以单一性能为筛菌指标，比如单纯考察抑菌活性或产酶能力等，对菌株整体性能的考量报道较少。

发明内容

本发明的目的是提供一株枯草芽孢杆菌WL-04及其在畜禽养殖中的应用，该菌对畜禽肠道条件性致病菌大肠杆菌病、沙门氏菌病、产气荚膜梭菌有显著抑制作用，并对益生菌的繁殖有促进作用；该菌能产生多种酶类，芽孢形态能够耐受较高浓度的人工胃酸、胆盐和饲料制粒过程中的高温等不利环境，将其作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中，能够有效地防范畜禽肠道疾病的爆发并能提高养殖动物的生产性能。

本发明一方面提供了一株枯草芽孢杆菌WL-04（Bacillus subtilis WL-04），已于2013年7月16日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2013343。

本发明的枯草芽孢杆菌WL-04在饲料添加剂领域的应用。

本发明的另一个方面提供一种包含上述枯草芽孢杆菌的微生物制剂。

上述的微生物制剂为枯草芽孢杆菌WL-04的菌粉，按质量百分比为0.1%-1%的比例添加至畜禽饲料中。

本发明的枯草芽孢杆菌WL-04，对畜禽肠道条件性致病菌如大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌的生长具有显著的抑制作用，其中对大肠杆菌和产气荚膜梭菌抑菌率较高，达75%以上；产酶较稳定，α-淀粉酶活力平均为22U/mL；中性蛋白酶活力平均为170U/mL；促进肠道益生菌的繁殖；能耐受饲料制粒高温；耐受低pH胃液、高浓度胆盐的逆环境的影响，并能有效提高养殖动物的生产性能，促进免疫器官发育，可作为饲料添加剂广泛应用于畜禽饲料中。

具体实施方式

本发明提供一株具有高效抑菌活性（能够有效抑制大肠杆菌病、沙门氏菌病、产气荚膜梭菌），稳定产淀粉酶和蛋白酶的芽孢杆菌，作为替代抗生素的饲用添加剂，可以在动物肠道中发挥作用，平衡肠道菌群，抑制肠道条件性致病菌的爆发，分泌多种酶类及维生素等，从而提高动物的生产性能，维护动物机体健康。

下面结合实施例对本发明的菌株进行详细的描述。

实施例1枯草芽孢杆菌WL-04分离与鉴定

1、芽孢杆菌的分离筛选

将在青岛市平度肉鸡养殖场采集的污泥，以1:10的比例加入无菌水中，振荡、混匀，制备成悬液，经80℃水浴处理10min，杀死大部分不耐热的菌株，初步获得耐热性好的芽孢杆菌。

2、具有抑制病原菌及高产酶能力的芽孢杆菌筛选

1）芽孢杆菌菌液制备：将分离的芽孢杆菌，分别接种于营养肉汤中，37℃，200rpm，振荡培养24h；

2）体外抑菌实验—微量肉汤法：将培养24h的芽孢杆菌液离心、收集上清，取无菌96孔培养板，按1:1比例加入芽孢杆菌上清液及病原菌液（实验所用病原菌为大肠杆菌（ATCC25922）、沙门氏菌（ATCC14028）、产气荚膜梭菌（ATCC13124）），在37℃，200rpm条件下共同孵育6h，计算抑菌率，公式如下：

A为对照组OD₆₀₀，A0为0h数据；A2为6h数据；

B为芽孢杆菌上清处理组OD₆₀₀，B0为0h数据；B2为6h数据；