[发明专利]鸡白介素-10单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及鸡白介素-10单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本发明进一步涉及该单克隆抗体在检测或纯化鸡白介素-10蛋白中的应用，属于鸡白介素-10单克隆抗体的制备及应用领域。 

背景技术

白细胞介素简称白介素，是由白细胞产生的、介导细胞间相互作用的细胞因子，在细胞的活化、增殖和分化中起调节作用。随着分子生物学的发展，有关鸡白介素基因和功能的研究已逐渐成为热点，从鸡中分离出多种白介素，能够应用于免疫治疗剂、免疫增强剂、构建新型基因工程疫苗等方面，利用白介素等细胞因子增强或调节机体的非特异性免疫，不仅会有效防控畜禽疾病，还能在畜牧业生产中产生巨大的经济效益。 

目前，用于分泌鸡白介素-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株存在效价低、稳定性差等缺陷，所分泌的单克隆抗体特异性较差，严重制约了生产应用，亟待改进。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一株稳定、高效分泌鸡白介素-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株； 

本发明的目的之二是提供由该杂交瘤细胞株分泌的鸡白介素-10单克隆抗体； 

本发明的目的之三是将所述的鸡白介素-10单克隆抗体应用于检测或纯化鸡白介素-10蛋白。 

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的： 

一株稳定、高效分泌鸡白介素-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株CHIL-10 2F6，其微生物保藏编号为：CGMCC NO.7657；分类命名为：鸡IL-10单克隆抗体杂交瘤细胞株；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间是2013年5月29日：保藏地址：中国北京朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。 

本发明以原核表达的重组蛋白ChIL-10为免疫原，真核细胞系表达的ChIL-10F和ChIL-10M蛋白为筛选原，细胞融合后以IFA筛选杂交瘤细胞上清，将初步判定为阳性的杂交瘤细胞经2次克隆化，获得3株分泌ChIL-10单抗的细胞株：2F6，3E6和3C12。本发明用IFA检测3株分泌ChIL-10单抗的细胞株培养上清，测定这3株阳性杂交瘤细胞株的效价，从效价测定结果来看，2F6阳性杂交瘤细胞株的单抗腹水IFA效价为1：2800，3E6阳性杂交瘤细胞株的单抗腹水IFA效价为1：1300，3C12阳性杂交瘤细胞株的单抗腹水IFA效价为1：1200；从效价测定结果来看，2F6阳性杂交瘤细胞株的单抗腹水IFA效价要显著高于其它2株阳性杂交瘤细胞株的单抗腹水IFA效价。 

本发明将阳性杂交瘤细胞株2F6、3E6和3C12所分泌的单克隆抗体分别与原核重组蛋白ChIL-10进行Western blot，试验结果发现，2F6阳性杂交瘤细胞株的单抗只与重组蛋白ChIL-10起反应，而不与空载体菌体反应，说明2F6阳性杂交瘤细胞株的单抗的特异性最好；阳性杂交瘤细胞株3E6和3C12所分泌的单克隆抗体与空载体菌体存在反应，特异性较差。 

本发明应用杂交瘤细胞株2F6所分泌的单克隆抗体检测经LPS刺激的外周血淋巴细胞中的IL-10蛋白，试验结果发现，不同B单倍型鸡的外周血淋巴细胞中均检测到一条17kDa大小的蛋白，检测到的蛋白均与天然ChIL-10蛋白17kDa相符。 

本发明鸡白介素-10单克隆抗体具有良好的特异性，可制备成检测或诊断鸡体内的IL-10蛋白的诊断试剂，例如，可以将本发明鸡白介素-10单克隆 抗体制备成诊断或检测IL-10蛋白的ELISA检测试剂盒。 

此外，本发明鸡白介素-10单克隆抗体还可应用于纯化鸡白介素-10蛋白；例如，将本发明单克隆抗体吸附在惰性的固相基质上制备成层析柱；当样品流经层析柱时，待分离的抗原与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到纯化的鸡白介素-10蛋白。 

附图说明

图1单克隆抗体亚类的鉴定结果；分别为2F6、3E6，3C12的细胞培养液的上清。 

图2腹水的IFA反应结果(200×)；A：腹水稀释50倍时的IFA结果；B：腹水稀释2000倍时的IFA结果；C：阴性对照。 

图3单抗与原核重组蛋白ChIL-10的Western blot的结果；1：原核重组蛋白ChIL-10；2：空载体菌体；M：蛋白质分子质量标准。 

图4利用单抗2F6检测经LPS刺激的鸡外周血淋巴细胞中的IL-10蛋白结果；1-2：两只鸡个体；M：蛋白质分子量质量标准。