[发明专利]一种基于妊娠糖尿病人血清LC/MS代谢组学分析方法

说明书

技术领域

 本发明涉及一种基于妊娠糖尿病人血清LC/MS代谢组学分析方法，具体涉及一种采用LC/MS正离子模式分析法分析正常孕妇和妊娠糖尿病孕妇血清中代谢物的方法。 

背景技术

糖尿病是一种严重危害人类生命和健康的疾病。随着人类生活水平的不断提高，生活节奏的加快和饮食的不科学，妊娠糖尿病的发病率逐年增加。妊娠糖尿病（GDM）是糖尿病的一种特殊类型，指妊娠前无糖尿病和糖耐量异常，在妊娠期发生或首次发现的糖尿病或糖耐量异常，不包括妊娠前已知的糖尿病患者。患病率从1%-14%不等，取决于研究的人群和使用的诊断性试验标准。土著居民GDM的患病率是非土著居民的2.5倍；土耳其GDM的患病率为1.23%；俄罗斯GDM的患病率为4.03%，糖耐量异常(IGT)为2.3%；墨西哥的一项流行病学研究表明，GDM为2.12%，IGT的患病率为13.2%；地中海地区GDM的患病率为9%，糖耐量受损是33%；我国天津的GDM患病率为2.31%。妊娠糖尿病系高危妊娠，它严重危害母儿的健康，具有餐后高血糖明显、空腹血糖偏低、易出现肾性糖尿等特点，此病一般发生于妊娠的中期或后期，并可能同时合并其他类型的糖尿病。

目前国际GDM的筛查诊断方法包括空腹血糖，随即血糖、临床高危因素和50g GCT，GCT是目前应用最广泛、最有效的方法。由于GDM的诊断存在地域和种族的差异，目前国内尚无统一的标准，因此，在国内找出一个妊娠糖尿病的早期诊断的方法显得尤为重要。

代谢组学 (metabonomics)是继基因组学、转录组学、蛋白质组学之后兴起的一个新的组学研究热点，是系统生物学的组成部分。代谢组学的主要研究对象是相对分子质量1000以下的内源性小分子，与转录组学和蛋白组学等其他组学相比，具有以下优点：基因和蛋白表达的微小变化会在代谢物水平得到放大；代谢组学的研究不需要进行全基因组测序或建立大量表达序列标签的数据库；代谢物的种类远少于基因和蛋白的数目；生物体液的代谢物分析可反映机体系统的生理和病理状态。通过代谢组学研究既可以发现生物体在受到各种内外环境扰动后的应答情况，也可以区分同种不同个体之间的差异。

代谢组学主要使用的分析方法有核磁共振波谱（NMR）、质谱（MS）、色谱（GC或HPLC）、红外光谱、毛细管电泳、紫外吸收、电化学检测等，其中色谱以其高分离度、高通量，质谱以其普适性、高灵敏度和特异性而成为最主要的分析工具，液相色谱或气相色谱与质谱联用分析范围更广，己成为代谢组学研究中最重要的研究工具，液相色谱一质谱联用系统(Liquid chromatography—massspectrometer，LC-MS)相比NMR具有更高灵敏度和分辨率的优势，在代谢组学领域得到了越来越广泛的应用。代谢组学现已广泛应用与临床诊断，主要是发现与疾病诊断、治疗相关的代谢标记物，通过代谢物谱分析得到的相关标志物是疾病的分型、诊断、治疗的基础。糖尿病是一种以糖代谢失常为主的内分泌代谢性疾病通常表现为整体的代谢紊乱，因此代谢组学的方法非常适合于糖尿病的研究。

本发明拟以妊娠糖尿病患者和妊娠正常对照人群的血清为研究对象，采用超高效液相色谱飞行时间质谱建立其代谢指纹图谱，并结合主成分分析进行模式识别，通过对比妊娠糖尿病患者和妊娠正常对照人群的代谢谱图，将妊娠糖尿病患者和妊娠正常对照人群很好的区分开，并试图从中发现一些潜在的特征代谢标志物,以期在国内建立一个统一标准的诊断方法。同时检测妊娠糖尿病患者不同治疗期的代谢谱图变化，以期通过患者血清中代谢物的变化，找出与妊娠糖尿病治疗相关代谢标志，为妊娠糖尿病的临床治疗提供理论依据。 

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中上述缺陷，提供一种基于妊娠糖尿病人血清LC/MS代谢组学分析方法，包括：收集正常孕妇及妊娠糖尿病孕妇的血清样本，经处理后经色谱柱分离，并采用质谱检测分析，在进行LC/MS检测分析后提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据，通过建立多维统计模型可视化地显示两组之间的代谢谱差异，获得两组之间的差异性代谢物，并对这些物质进行初步鉴定。本发明方法可以全面、综合地体现妊娠糖尿病患者的代谢产物的变异状况，可用于妊娠糖尿病的早期诊断和预后提供有利的技术支持。

本发明的解决上述技术问题的方案是：一种基于妊娠糖尿病人血清LC/MS代谢组学分析方法，包括：

（1）样品制备：收集正常孕妇及妊娠糖尿病孕妇的血清样本，经处理后准备进行LC/MS检测分析；

（2）LC/MS检测分析：将血清样本经色谱柱分离，并采用质谱检测分析；