[发明专利]一种基于妊娠糖尿病人血清LC/MS代谢组学分析方法

权利要求书

1.一种基于妊娠糖尿病人血清LC/MS代谢组学分析方法，包括：

（1）样品制备：收集正常孕妇及妊娠糖尿病孕妇的血清样本，经处理后准备进行LC/MS检测分析；

（2）LC/MS检测分析：将血清样本经色谱柱分离，并采用质谱检测分析； 

（3）数据分析：提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据，通过建立多维统计模型可视化地显示两组之间的代谢谱差异，获得两组之间的差异性代谢物，并对这些物质进行初步鉴定。

2.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，所述步骤（1）中处理方法为：取冷冻储存的样本，置室温下解冻15min，涡漩震荡5s；分别取100μL的样本加入300 μL HPLC级甲醇，涡漩震荡30s，4°C静置20min；所有样本进行冷冻离心，取200 μL上清液，转入进样小瓶。

3.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，所述步骤（1）中冷冻离心条件为12000rpm、 4°C、15min。

4.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤（2）中LC/MS检测分析的仪器分析平台为LC-Q/TOF-MS，分离色谱柱为C18色谱柱（Agilent, 100 mm × 2.1 mm，1.8 μm）；色谱分离条件为：柱温为40℃；流速0.4 mL/min；流动相组成A：水+0.1%甲酸，B：乙腈+0.1%甲酸；梯度洗脱；进样量为4 μL，自动进样器温度4℃。

5.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤（2）质谱条件：正离子模式条件：以氮气作为雾化、锥孔气；飞行管检测模式V型；正离子模式条件为：毛细管电压4 kV、锥孔电压35 kV、离子源温度100 ℃；脱溶剂气温度350 ℃、反向锥孔气流50 L/h、脱溶剂气600 L/h、萃取锥孔4 V；离子扫描时间0.03 s、扫描时间间隔0.02 s、数据采集范围：50-1000 m/z；应用亮氨酸-脑啡肽作为锁定质量，正离子模式下产生[M+H]⁺离子556.2771 Da。

6.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，所述步骤（3）中提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据为：采用Agilent MassHunter 工作站采集总离子流图(TIC)进行可视化检查，通过多个样本图谱的重叠，判断仪器在分析样本时是否符合代谢组学分析要求，进行稳定性和重复性的考察。

7.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤（3）中在建立多维统计模型具体为：在R软件平台下采用自写的程序代码提取原始数据信号（峰识别和积分），然后进行保留时间校正、峰对齐和反卷积分析（质谱碎片归属），最后在EXCEL软件中进行后期编辑，将结果组织为二维数据矩阵，包括变量保留时间Rt，质荷比m/z、观察量（样本）和积分面积；将编辑后的数据矩阵导入Simca-P软件（版本11.0）分别进行主成分分析（PCA），偏最小二乘方判别分析（PLS-DA），正交偏最小二乘方分析（OPLS）并且按照OPLS的VIP值挖掘差异代谢物质。