[发明专利]一种磷脂酶C

说明书

本发明提供了一种磷脂酶C、其编码序列、及其生产和应用。本发明提供的磷脂酶C可水解磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺，具有于酸性pH区域或中性pH区域或碱性pH区域附近有效水解磷脂的能力，具有广泛的pH区域的耐受性，并且具有一定程度的热稳定性，对锌离子敏感，不依赖锌发挥水解能力。对于酶的发酵生产以及工业化应用都有很重要的意义。

技术领域

本发明涉及酶脱胶领域，具体的，涉及一种磷脂酶C。

背景技术

催化水解磷脂的酶都可以称为磷脂酶，它们广泛分布与自然界中，发挥了多种多样的功能，从蛇毒的毒性(Janssen et al.1999)到信号传导(Singer et al.1997)到人类消化，都是磷脂酶参与的生物学特性和过程(De Maria et al.2007)。虽然磷脂酶的底物都是磷脂，但是它们可以作用于磷脂分子上的不同位点，根据水解位点不同，磷脂酶被分为五种：phospholipase A1(PLA1)，phospholipase A2(PLA2)，phospholipase B(PLB)，phospholipase C(PLC)和phospholipase D(PLD)。比如，PLA1和PLA2可分别水解甘油基sn-1，sn-2位置上的脂肪酸酰基酯键。PLA1和PLA2可以相应的催化产生游离脂肪酸和2-acyllysophospholipid或者1-acyl lysophospholipid。溶血磷脂上的脂肪酸再继续被phospholipase B(PLB)水解而游离出来。PLC被定义为一种磷酸二酯酶，可以水解甘油磷酸键，产生甘二酯。PLD可作用于磷脂产生磷脂酸(Ramrakhiani and Chand2011)。磷脂酶是一类很重要的可水解磷脂的酶，因为水解位置不同，可释放出多种不同的底物，比如溶血磷脂(lysophospholipids)，游离脂肪酸(free fatty acids，FFAs)，甘二酯(diacylglycerols，DGs)，磷酸胆碱(cholinephosphate)和磷脂酸盐(phosphatidates)。现今，磷脂酶已经被应用于面包制造，蛋黄工业和植物油脱胶(Clausen2001)。

磷脂广泛存在于所有的生物体内，它们和糖脂、胆固醇一起，是生物膜结构的重要组成部分(De Maria et al.2007)。磷脂主要在三个方面发挥了重要的作用：保持了生物膜结构的完整性(White et al.2001)，参与了许多代谢有关和神经系统的疾病(Lee1998)，以及作为信号物质调控了许多生物过程(Hannun et al.2001)。磷脂分子通常由非极性的二酰基部分和极性的含磷部分组成，酰基部分的特性和含磷部分的构成决定了这个磷脂的分类，特点以及生物学功能。植物油中的磷脂主要包括phosphatidylcholine(lecithin，PC，磷脂酰胆碱)，phosphatidylethanolamine(PE，磷脂酰乙醇胺)，phosphatidylinositol(PI，磷脂酰肌醇)，phosphatidic acid(PA，磷脂酸)，phosphatidylserine(PS，磷脂酰丝氨酸)，phosphatidylglycerol(PG，磷脂酰甘油)，diphosphatidylglycerol(DPG，二磷脂酰甘油)及N-acyl phosphatidylethanolamine(NAPE，乙酰基磷脂酰乙醇胺)等。植物油中的磷脂包括水化磷脂和非水化磷脂。水化磷脂和非水化磷脂的不同主要在于和磷脂酸的羟基相连的官能团不同。水化磷脂包括PC、PE、PI，都含有极性较强的基团，例如胆碱、乙醇胺、肌醇等，因此具有比较强的亲水性。非水化磷脂包括具有非脂类性质的含磷物质，以酸的形式存在的磷脂酸和聚磷脂酸，还包括溶血磷脂(Padley et al.1994)。