[发明专利]一种分离提纯多抗菌素的方法有效
| 申请号： | 201310556551.1 | 申请日： | 2013-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN103613641A | 公开（公告）日： | 2014-03-05 |
| 发明（设计）人： | 胡永红;支文标;杨文革;曹峥;李佼佼;殷晶晶 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C07K5/083 | 分类号： | C07K5/083;C07K5/062;C07K1/34 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;袁正英 |
| 地址： | 210009 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分离 提纯 多抗 菌素 方法 | ||
1.一种分离提纯多抗菌素的方法，其具体步骤如下：
（1）取链霉菌发酵液，用纱布过滤，发酵液过滤后继续用冰水清洗纱布，收集滤过液，向滤过液中加入脱氧胆酸钠溶液，静置10～20min；
（2）将步骤（1）所得的滤过液进行离心，收集上清液；
（3）将步骤（2）所得的上清液体转移到容器中，加入三氯乙酸溶液，将容器密封后，0～4℃下静置8～16h；
（4）将步骤（3）得到的溶液离心，弃上清液，用有机溶剂冲洗沉淀后移入超滤管内；
（5）向步骤（4）的超滤管内加4～6倍体积步骤（4）中的有机溶剂，稀释；
（6）将步骤（5）得到的液体离心后，继续添加有机溶剂稀释到步骤（5）中稀释后溶液的体积数；
（7）重复步骤（6）3～5次，最终离心浓缩至步骤（5）稀释后溶液体积的1/8～1/12；
（8）将步骤（7）所得的浓缩液体转移出，用冻干机冻干后，得到的粉状物即为多抗菌素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（1）中所述的纱布为80～120目，层数为3-6层，所述的清洗用的冰水与发酵液体积比为0.15～0.20:1；所述的冰水温度为0～4℃。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（1）中所述的脱氧胆酸钠溶液的浓度为0.015～0.025g/mL；添加的脱氧胆酸钠溶液与最初链霉菌发酵液体积比为0.008～0.012:1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（2）和（4）中所述的离心转速为8000～10000rpm，离心时间为20～30min，离心温度为2～6℃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（3）中所述的三氯乙酸溶液的浓度为0.8～1.2g/mL，添加的溶液与最初链霉菌发酵液体积比为0.10～0.15:1。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（4）中所述的用于清洗的有机溶剂与步骤（1）中最初链霉菌发酵液的体积比为0.01～0.02：1。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（4）、（5）和（6）中所述的有机溶剂均为甲醇、乙醇或丙酮。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（5）中所述的超滤管的滤膜截留分子量为1～3kDa。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（6）中所述的离心转速为4000～5000rpm，离心时间为30～40min，离心温度为2～6℃。
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