[发明专利]一种江蓠愈伤组织的诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种江蓠愈伤组织的诱导方法。

背景技术

江蓠（Gracilaria verrucosa）是我国常见的一种红藻，藻体内含有大量的琼脂和脂肪酸，不但广泛应用于琼脂生产工业，也是人们餐桌上的一道美食。目前，江蓠主要以野生资源为主，人工栽培技术还不成熟，限制人工育种的主要因素是种藻来源不稳定、种质资源匮乏。目前，江蓠主要采用孢子繁殖的方式进行人工育苗，育种周期比较长，孢子萌发率不高，相对于用来育种的种藻，得到的新藻的收率不理想。

植物组织培养技术可以快速繁殖，周年生产，不受季节限制；种苗整齐度高，可以进行新品种培育，。所需材料较少，繁殖系数大，可以在一年内由一个茎段培养出数百万种苗。目前，对于江蓠的消毒技术、诱导培养基成分和培养条件还处于探索阶段，所以江蓠的植物组织培养技术还比较落后，很难诱导出愈伤组织，或者愈伤组织的诱导率极低。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种江蓠愈伤组织的诱导方法，可以短时间内、快速育繁大量的愈伤组织，为江蓠的人工育苗提供充足的种质资源。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

一种江蓠愈伤组织的诱导方法，包括如下步骤：江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养14-21d即可形成江蓠愈伤组织。

进一步的，所述的诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2-4mg，IAA 0.5-1mg、KT0.5-1mg、蔗糖30g。

优选的，1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 1mg、KT 1mg、蔗糖30g。

优选的，所述的摇床培养的转速为80-100r/min。

本发明的有益效果是：

首次成功的以江蓠叶状体作为外植体诱导愈伤组织形成，且愈伤组织的诱导率可以达到82%，愈伤组织可以进一步发育形成江蓠的芽或者叶状体，不但可行形成大量的江蓠叶状体，还可以为江蓠提供丰富的种质资源。

具体实施方式

以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果：

实施例1：

江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 0.5mg、KT0.5mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为80r/min。培养1个月后，有60块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为60%。

实施例2：

江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 0.5mg、KT0.5mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为100r/min。培养1个月后，有65块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为65%。

实施例3：