[发明专利]一种利用猪源生产犬用多联高免血清的制备方法

说明书

技术领域：

    本发明涉及犬用多联高免血清的制备，特别是一种利用猪源生产犬用多联高免血清的制备方法。

背景技术：

随着人民生活水平的提高，人们饲养犬的数量与日俱增，相应的犬病大量增加，如犬瘟热、犬细小病毒病、犬传染性肝炎、犬传染性喉气管炎、犬流感、犬副流感等严重影响犬的健康，一些人兽共患的疾病如狂犬病直接威胁人类健康。

目前，国内外已有多种抗病毒血清、抗细菌毒素或免疫球蛋白制剂应用于临诊实践，用于疾病的紧急预防与治疗，如抗狂犬病血清、破伤风抗毒素血清等，这些抗血清多数是使用马属动物或犬制备的，这些生物制品一方面工艺复杂，成本很高，另一方面用犬生产的抗血清由于来自于本种动物，不可避免会导致垂直传播或水平传播某种传染病的可能。

发明内容：

本发明的是设计一种生产工艺简单、产品效果好的利用猪源生产犬用多联高免血清的制备方法。

本发明的技术方案是，一种利用猪源生产犬用多联高免血清的制备方法，其特征在于：选择健康状况良好的母猪，对其使用含有黄芪多糖的犬五联活疫苗多次强化免疫，接种的方法为皮下或肌肉多点注射，接种的部位为颈部两侧或臀部两侧，接种剂量从首次的3-5头份逐次递增至15-20头份，最后一次免疫剂量增加至20头份，每次免疫间隔2-4周，最后一次免疫后2-4周，然后进行心脏采血，分离血清，再将血清灭活除菌，然后检测抗体效价，其中犬瘟热及狂犬病病毒中和抗体效价得到1:256以上，其余病毒血凝抑制抗体效价达到1:256以上为适用。所述的血清灭活除菌步骤为：收集的血清混合均匀，加入终浓度为0.3%-0.5%的TNBP（磷酸三丁脂）和1%-3%的吐温-80或1%-3%Triton-100，24℃6-8h；再经⁶⁰Co-γ 射线辐照灭菌，辐照温度为20℃，辐照剂量率为14.0Gy/min，辐照吸收剂量为12kGy。所述的含有黄芪多糖的犬五联活疫苗，其黄芪多糖含量为80-320ug/ml。

本发明所述的制备方法简单易行，成本低廉，经济实用，可广泛用于犬主要疫病的紧急预防和治疗。

本发明的技术方案由如下过程组成：

1.免疫原：市售的犬五联活疫苗;①美国辉瑞生产，预防犬瘟热、犬腺病毒1型引起的传染性肝炎、犬腺病毒2型引起的呼吸道病、犬副流感和犬细小病毒肠炎;②吉林五星药厂生产,用于预防狂犬病、犬瘟热、犬副流感、腺病毒感染及犬细小病毒感染。

2.动物免疫：

选择体格较大，健康状况良好，产仔6胎以上，繁殖力下降，无种用价值的淘汰母猪。在卫生状况良好，专人管理的条件下饲养，对其使用上述添加黄芪多糖重量份数为80-320ug/ml的疫苗进行多次强化免疫。接种的方法为皮下或肌肉多点注射，接种的部位为颈部两侧或臀部两侧。

接种剂量从首次的3-5头份逐次递增至15-20头份，最后一次免疫剂量增加至20头份。每次免疫间隔2-4周，最后一次免疫后2-4周，检测抗体效价。依据抗体效价确定强化免疫时间及采血时间。

3.血液采集及血清分离：

强化免疫后14-30d之间检测抗体效价，达到规定的效价水平要求后即可采血。采血最好在上午空腹时进行，禁食时间在6h以上，可避免血中乳糜的发生从而获得澄清的血清。将待采血母猪用清水冲洗干净后固定在“X”型的保定架上，使猪仰卧，将猪尾部垫高，将位于胸前口左侧的被毛刮除干净，并用3%碘酒消毒，后用75%酒精脱碘，将事先消毒完好的空心铜管（一端尖、一端平，长40cm、直径约1cm）平头一端套上消毒完好的硅橡胶管，经消毒的胸前口捅入猪的心脏（不宜深入太长防止完全穿透心脏），将胶管游离端插入预先装有少量灭菌生理盐水的离心管中收集血液，室温放置,待血块收缩完全后置4℃过夜，4000rpm离心20min收集血清。

4.血清灭活除菌

将上述收集的血清混合均匀，加入终浓度为0.3%-0.5%的TNBP（磷酸三丁脂）和1%-3%的吐温-80或1%-3%Triton-100,24℃6-8h；再经⁶⁰Co-γ 射线辐照灭菌，辐照温度为20℃，辐照剂量率为14.0Gy/min，辐照吸收剂量为12kGy。

5.效价测定

犬瘟热及狂犬病病毒抗体通过微量中和试验测定，犬副流感、腺病毒I型和2型及犬细小病毒病毒抗体均通过微量血凝抑制病毒试验测定，犬瘟热及狂犬病病毒中和抗体效价得到1:256以上，其余病毒血凝抑制抗体效价达到1:256以上为合格。

6.无菌检查