[发明专利]一种基于磁珠快速检测PP65的方法有效
| 申请号： | 201310549511.4 | 申请日： | 2013-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN103543275A | 公开（公告）日： | 2014-01-29 |
| 发明（设计）人： | 张波;夏宇;王永虎 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 谭春艳 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 快速 检测 pp65 方法 | ||
1.一种基于磁珠快速检测PP65的方法，包括以下步骤：
（1）在离心管中加入0.5～1μL的羧基修饰磁珠，MES清洗三次，加入80～100μL0.5g/L的EDC，37℃活化2～4小时；
（2）直接加入2～5μM HEX红色荧光标记的与人巨细胞病毒PP65抗原具有特异性的适配子，室温轻轻震荡孵育4～6小时，磁分离后弃上清，Washing buffer清洗三次；所述适配子为SEQ ID No.1～SEQ ID No.6的序列之一；
（3）用0.1～0.3%的BSA80～120μL37℃封闭过夜，Washing buffer清洗三次；
（4）磁分离后弃上清，加入待检样品，室温轻轻震荡孵育10～14小时；
（5）磁分离后弃上清，Washing buffer清洗三次，加入8～12ng的用Binding buffer配置的FITC绿色荧光标记的PP65单克隆抗体，室温孵育6～10小时；
（6）磁分离后弃上清，Washing buffer清洗三次，加入30～70μL的Binding buffer，荧光显微镜下观察；如果待检样品中有PP65抗原，则在显微镜下既能看到红色荧光又能看到绿色荧光；如果待检样品中没有PP65抗原，则在显微镜下只能看到红色荧光，不能看到绿色荧光。
2.根据权利要求1所述的一种基于磁珠快速检测PP65的方法，其特征在于：步骤（2）中所述适配子SEQ ID No.1～SEQ ID No.6的二级构象依次分别为：
3.根据权利要求1或2所述的一种基于磁珠快速检测PP65的方法，其特征在于：所述的Binding buffer为：PBS,5mM MgCl2,0.05%tween-20，pH7.5。
4.根据权利要求1或2所述的一种基于磁珠快速检测PP65的方法，其特征在于：所述Washing buffer为：PBS,5mM MgCl2,0.01%tween-20，pH7.5。
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