[发明专利]一种环状的合成多肽B及其抗菌抗病毒应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种环状的合成多肽B及其抗菌抗病毒应用，具体地说是一种合成的衍生自中国明对虾抗脂多糖因子FcALF2的脂多糖（LPS）结合结构域的环状多肽及其抗菌抗病毒应用。

背景技术

对虾的养殖在我国的水产养殖业中占有重要地位，近些年来，对虾养殖过程中的病害问题已经严重阻碍了其养殖生产的健康发展，抗生素的滥用与环境的恶化使海水养殖动物的病害难以从根本上得到控制。

抗菌肽（蛋白）被认为是鱼、虾、贝等防御细菌、病毒等外源病原感染的重要效应分子，在动物的先天免疫过程中发挥重要作用。目前从甲壳动物中发现的抗菌肽种类繁多，抗脂多糖因子（anti-lipopolysaccharide factor，ALF）就是其中一种重要的抗菌肽。1982年，Tanaka等首次从中国鲎（Tachypleus tridentatus）和北美鲎（Limulus polyphemus）的血细胞中分离得到ALF，并发现其能抑制LPS介导的凝血反应的激活。1985年，Morita等发现ALF还具有很强的抗革兰氏阴性菌活性。之后，人们相继在斑节对虾（Penaeus monodon）、中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）、日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）、凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）、桃红对虾（Farfantepenaeus duorarum）等多种甲壳动物中发现ALF基因的存在，并证实ALF的重组蛋白具有广泛的抗革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌生长的活性。另外，研究还发现对虾白斑综合征病毒（WSSV）预先与重组表达的ALF蛋白一起孵育后再注射入虾体中，能抑制虾体中WSSV的复制。

与传统抗生素的作用机理不同，ALF直接中和细菌细胞壁的脂多糖，溶解细菌，因此不易产生细菌的耐药性。ALF对病毒的作用机理目前仍不清楚。随着抗生素的应用，许多病原菌对现有抗生素逐步产生耐药性，而新型抗生素的发现又极其困难，因此，ALF的研究为开发新型抗菌药物开辟了广阔的前景。

研究发现，ALF氨基酸序列中的两个保守半胱氨酸之间形成二硫键，并与之间的氨基酸序列共同形成一段阴离子多肽，具有与LPS结合的能力，这段保守的结构命名为LPS结合结构域，被认为是ALF降解革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖的功能域。2011年，Sachin Sharma等研究了根据锯缘青蟹（Scylla serrata）ALF的LPS结合结构域合成的具24个氨基酸残基的多肽在抗菌免疫过程中作用，发现合成多肽SsALF24具有结合LPS的活性并且对大肠杆菌都具有明显的抑制作用，其最小抑制浓度为16.16～32.32uM（Sharma S,Yedery RD,Patgaonkar MS,Selvaakumar C,Reddy KV.Antibacterial activity of a synthetic peptide that mimics the LPS binding domain of Indian mud crab,Scylla serrata anti-lipopolysaccharide factor(SsALF)also involved in the modulation of vaginal immune functions through NF-kB signaling.Microbial pathogenesis2011;50:179-191.）。

中国明对虾中的FcALF2已被发现，研究表明其在对虾体内响应病毒的感染（Li SH,Zhang XJ,Sun Z,Li FH,Xiang JH.Transcriptome analysis on Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis during WSSV acute infection.PLoS ONE,8(3):e58627.）。基于已有的研究结果，本发明依据中国明对虾FcALF2的推导氨基酸序列，利用化学合成的方法获得了其LPS结合结构域的环形多肽B，该环状多肽具有明显的抗菌抗病毒生物学活性，具有重要的应用前景。

发明内容

本发明旨在提供一种来源于对虾的环状的合成多肽B，具有明显的抗菌和抗病毒活性。

本发明的技术方案如下：

利用化学合成的方法获得了环状的合成多肽B，具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，其序列特征为：

SEQ ID No.1：Ac-Yc(CSFNVTPKFKRWQLYFRGRMWC)P-NH₂