[发明专利]一种对大肠杆菌进行转化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种实验方法，具体来说，一种对大肠杆菌进行转化的方法。 

背景技术

肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核生物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。大肠杆菌属于细菌。大肠杆菌是与我们日常生活关系非常密切的一类细菌，学名称作“大肠埃希菌”，属于肠道杆菌大类中的一种。它是寄生在人体大肠里对人体无害的一种单细胞生物，结构简单，繁殖迅速，培养容易，它是生物学上重要的实验材料。在婴儿刚出生的几小时内，大肠杆菌就经过吞咽在肠道内定居了。正常情况下，大多数大肠杆菌是非常安分守己的，他们不但不会给我们的身体健康带来任何危害，反而还能竞争性抵御致病菌的进攻，同时还能帮助合成维生素K2，与人体是互利共生的关系。只有在机体免疫力降低、肠道长期缺乏刺激等特殊情况下，这些平日里的良民才会兴风作浪，移居到肠道以外的地方，例如胆囊、尿道、膀胱、阑尾等地，造成相应部位的感染或全身播散性感染。因此，大部分大肠杆菌通常被看作机会致病菌。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

一种对大肠杆菌进行转化的方法，步骤如下：首先去需要进行转化的大肠杆菌的感受态细胞，其之前需要冷藏在温度不高于零下70度的冰箱中，且时间不少于24小时；去除后将其在冰上融化；然后将ＤＮＡ连接物加入细胞中，混合均匀后放置在温度为零下２－零下４摄氏度的冰箱中至少十分钟；其后进行双酶切；复苏后将带有转化子细胞的菌液离心分离；用移液器进行重悬；至于烤箱中培养１０小时即可。

本发明中，复苏钱需要将其放在３５摄氏度的环境下进行预热。 

本发明中，双酶切的时候，回收片段需要提取质粒。 

本发明的有益效果是，成本低，对环境污染小，可以作为大量制备GK8 的途径。 

具体实施方式

一种对大肠杆菌进行转化的方法，步骤如下：首先去需要进行转化的大肠杆菌的感受态细胞，其之前需要冷藏在温度不高于零下70度的冰箱中，且时间不少于24小时；去除后将其在冰上融化；然后将ＤＮＡ连接物加入细胞中，混合均匀后放置在温度为零下２－零下４摄氏度的冰箱中至少十分钟；其后进行双酶切；复苏后将带有转化子细胞的菌液离心分离；用移液器进行重悬；至于烤箱中培养１０小时即可。复苏钱需要将其放在３５摄氏度的环境下进行预热；回收片段需要提取质粒。 

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。