[发明专利]构建和培育耐盐草坪草的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种构建和培育耐盐草坪草的方法，属于生物转基因技术领域。

背景技术

目前，我国耕地有18亿亩，盐碱地面积占到5.4亿亩，我国西部地区地处干旱半干旱地区，由于干旱缺水，盐碱化、荒漠化现象严重。同时，由于近几年来气候原因，全球变暖和人类的活动，使得全国耕地面积变化总体呈现一种下降的趋势，这种现象也日趋严重，已经成为亟待解决的世界性问题。

现有改善盐碱地的主要方法是构建大量的排水网络，使地表盐分随着灌溉水或降雨流入低处，以及将脱硫渣掺入盐碱地，改善土壤pH值，促进植物生长。但是所有这些方法需要大量的前期投入。

草坪草作为重要的禾本科草本植物，具有很多优点，是现代化都市中不可缺少的生态环境组成部分。不仅具有保持水土、改造自然、美化环境、改善生态环境等功能，而且可以提供高质量的运动和休憩场地。长期种植还可以改良盐碱土壤，防止水土流失，增加土壤的肥沃度、保护生态环境。

发明内容

本发明的目的在于利用基因工程的方法构建并培育能耐较高盐分的草坪草的方法，从而改善和利用盐碱地。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种构建和培育耐盐草坪草的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（一）、构建农杆菌重组二元质粒：将拟南芥SOS1，SOS2，SOS3，CBL10完整的表达基因克隆，并将其植入大肠杆菌二元质粒，获得重组二元质粒；

（二）、转化农杆菌和草坪草：将重组二元质粒导入农杆菌，并感染草坪草愈伤组织；

（三）、选择和培育转基因草坪草。

前述的构建和培育耐盐草坪草的方法，其特征在于，在步骤（一）中，选择KEGT-A作为重组二元质粒基本框架，在KEGT-A插入选择基因BAR基因。

前述的构建和培育耐盐草坪草的方法，其特征在于，重组二元质粒的结构为：

RB基因-TM220基因-SOS1基因-SOS3基因-SOS2基因-TM1基因-CBL10基因-TM2基因-BAR基因-TM220基因-LB基因。

前述的构建和培育耐盐草坪草的方法，其特征在于，在步骤（二）中，前述的草坪草愈伤组织由草坪草种子在MS+5.5ml/L2,4-D培养基中转化而来。

前述的构建和培育耐盐草坪草的方法，其特征在于，在步骤（三）中，前述的转基因草坪草在MS+2.0ml/L6-BA+1.0ml/L KT培养基中分化出幼芽。

前述的构建和培育耐盐草坪草的方法，其特征在于，在步骤（三）中，前述的转基因草坪草在1/2MS+0.3ml/L IBA培养基中分化出根，前述MS培养基的铁盐加倍。

本发明的有益之处在于：转基因耐盐草坪草的构建和培育为改良盐碱地提供了一个新途径，它使盐碱地的改良工程提升到了高新科技的基因工程；这种方法的投入量很少，并且无性繁殖使它具有了不可估量的长远效益。

附图说明

图1是本发明的构建和培育耐盐草坪草的方法的流程图；

图2是二元重组质粒的结构示意图；

图3是转基因苜蓿基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图；

图4是SOS1基因PCR扩增电泳图；

图5是S0S2基因PCR扩增电泳图；

图6是SOS3基因PCR扩增电泳图；

图7是CBL10基因PCR扩增电泳图；

图8是Southern杂交结果图；

图9是Northern杂交中SOS1基因的转录水平表达结果图；

图10是Northern杂交中SOS2基因的转录水平表达结果图；

图11是Northern杂交中SOS3基因的转录水平表达结果图；

图12是Northern杂交中CBL10基因的转录水平表达结果图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。

参照图1，本发明的构建和培育耐盐草坪草的方法，包括以下步骤：

（一）、构建农杆菌重组二元质粒：将拟南芥SOS1，SOS2，SOS3，CBL10完整的表达基因克隆，并将其植入大肠杆菌二元质粒，获得重组二元质粒；

（二）、转化农杆菌和草坪草：将重组二元质粒导入农杆菌，并感染草坪草愈伤组织；

（三）、选择和培育转基因草坪草。

下面以高羊茅为例进行说明，其他草坪草的操作一样。

首先，用PCR将拟南芥SOS基因的完整编码序列从它的cDNA克隆中扩增。