[发明专利]与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种分子标记，尤其涉及一种与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记。

背景技术

芜菁花叶病毒病（Turnip mosaic virus,简称TuMV）属马铃薯Y病毒科(Potyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyviruse Y)，主要通过蚜虫或汁液接触传毒。TuMV是马铃薯Y病毒科中寄主范围最广、危害最大的病毒，在世界范围内分布相当广泛，除南极洲外，各大洲均有分布，而且寄主范围十分广泛，可侵染43个科156个属的318种的双子叶植物(包括十字花科、菊科、藜科、豆科、石竹科等)和部分单子叶植物（Walsh and Jenner2002）。在我国大白菜生产中，平均每年造成5%的产量损失，有些年份减产10%以上，病害严重的地块几乎绝收。该病防治困难，化学防治效果不理想，最有效且可持续的防治措施就是培育抗病品种（Hughes et al.2002）。利用分子标记辅助选择或通过基因工程手段改良或创新种质，可大大加快育种进程，是现代育种的发展趋势。

研究表明，大白菜芜菁花叶病毒的遗传规律十分复杂（谭其猛1980；Provvidenti1980；Leung and Williams1983；钮心恪1984；Suh1995；闫瑾琦2000；Yoon et al.1993；韩和平2003；Rusholme等2007；潘春清2007；张晓伟等2009；屈淑平等2009；Li et al.2011；李巧云等2012；钱伟等2012），在多个位点上存在多种变异。

已定位在白菜上的TuMV抗性基因TuRB0lb(Rusholme et al.2000)、retr01和ConTR0l（Rusholme et al.2007）以及retr02（Qian et al.2013）分别位于第6、4、8和4号染色体上。

本研究室已经对大白菜抗芜菁花叶病毒(TuMV)及大白菜及芸薹属中与抗性有关的EST序列进行了研究（大白菜抗芜菁花叶病毒(TuMV)EST-SSR信息分析与引物筛选，中国农学通报2012,28(10):121-126），为研究大白菜抗性进行奠定了基础。随后，本研究室以抗病材料‘8407’和感病材料‘冠291’为亲本，构建分离群体，利用上述的方法，鉴定出一个新的TuMV抗性基因，命名为TuRBCS01；已利用BSA法将该基因定位于白菜A基因组4号染色体上的两个标记SAAS_mDN192117a_159(6.3cM)和SAAS_mGT084561_233(6.1cM)之间约4.61Mb的区域（6423740～11033899）（大白菜抗芜菁花叶病毒（TuMV）基因分子标记筛选与定位，青岛农业大学硕士学位论文，张晓亮，2012年6月）。与其它定位在白菜4号染色体上的TuMV隐性抗性基因retr01和retr02不同的是，该TuRBCS01基因为显性基因，位于白菜基因组4号染色体上8284905-10261992之间约1.98Mb的区域。相对于隐性抗病基因，显性基因在育种上的应用更为便捷，只需亲本之一为抗病材料即可直接应用。鉴于此，对显性TuMV抗性基因TuRBCS01进行精细定位，获得与TuRBCS01紧密连锁甚至共分离的分子标记，将为TuRBCS01的克隆奠定基础，同时为基因TuRBCS01的辅助选择提供更有效的分子标记。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记。

本发明提供了一种与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记，该分子标记的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，该标记片段大小为194bp。

本发明还提供了一种扩增与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记的引物对，该引物对的正向引物序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明还提供了一种与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记的检测方法，该方法以抗、感TuMV的大白菜材料的基因组DNA为模板，经PCR扩增，得到能同时鉴定父本、母本及其杂合体基因型的特异谱带，该特异谱带包括携带抗性基因的植株特异谱带和不携带抗性基因的植株特异谱带，所述携带抗性基因的植株谱带为核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的分子标记。

所述不携带抗性基因的植株谱带的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。