[发明专利]检测甲型肝炎病毒的方法及量子点标记免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫检测方法，特别是涉及使用量子点标记免疫层析试纸，以免疫学的方法检测甲型肝炎病毒的方法。

背景技术

甲型病毒性肝炎简称甲型肝炎，是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的一种急性传染病。临床上表现为起病急，有畏寒、发热、食欲减退、恶心、疲乏、肝肿大及肝功能异常。部分病例出现黄疸，无症状感染病例较常见，一般不转为慢性和病原携带状态。甲型肝炎传染源通常是急性患者和亚临床感染者，病人自潜伏末期至发病后10天传染性最大，粪-口传播是其主要传播途径，水、食物是爆发性的主查方式，日常生活接触是散发病例的主要传播途径。

目前，常用的检测方法是胶体金法，此法虽然检测快速简便，容易操作，但是准确率较低，灵敏度也较低。因此寻求一种价格便宜、操作简便、灵敏度和特异性都较高的检测方法是迫切需要解决的问题。

发明内容

针对上述技术的不足之处，本发明提供一种价格便宜、操作简便、灵敏度和特异性都较高的检测试纸以及用该试纸检测甲型肝炎病毒的方法。

一种量子点标记免疫层析试纸，设有塑料板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜A、量子点标记甲型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、吸水纸；

其中，所述塑料板上依次粘贴有玻璃纤维素膜A、量子点标记甲型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸；

其中，所述硝酸纤维素膜一端有甲型肝炎病毒多克隆抗体和兔抗鼠二抗，以此形成检测带T和质控带C；

其中，所述量子点标记的甲型肝炎病毒单克隆抗体位于玻璃纤维素膜B的一端，与检测带T和质控带C相对应，并且量子点标记的甲型肝炎病毒单克隆抗体位于进样点一端。

优选的，所述量子点为CdTe/ZnSe核壳量子点。

优选的，所述塑料板为粘性PVC底板。

优选的，所述甲型肝炎病毒多克隆抗体的浓度为0.5g/L。

优选的，所述兔抗鼠二抗的浓度为1.0g/L。

优选的，所述检测带T和质控带C间距不少于5mm。

如上所述的试纸的制备方法，包括如下步骤：

（1）量子点与甲型肝炎病毒单克隆抗体的偶联：

取0.01M的PBS缓冲液100～200uL与5～20uL表面连有羧基的量子点；

选取偶联试剂，偶联试剂选自羟基硫代琥珀酸亚胺、1-（3-二甲基氨丙基）-3乙基碳二胺盐酸盐；

加入甲型肝炎病毒单克隆抗体150～200uL；

摇床反应1～4小时；

层析柱过滤，离心纯化；

用1%～5%的牛血清白蛋白封闭；

4℃保存；

（2）试纸的制备：

用0.05～0.15M的PBS缓冲液稀释甲型肝炎病毒多克隆抗体及兔抗鼠二抗，将0.5g/L甲型肝炎病毒多克隆抗体和1.0g/L兔抗鼠二抗喷在硝酸纤维素膜一端，形成检测带T和质控带C，T带和C带间隔5mm，室温晾干，将硝酸纤维素膜放入PBS缓冲液中，37℃封闭待用，或者干燥后4℃保存；

将量子点标记甲型肝炎病毒单克隆抗体均匀喷覆于玻璃纤维膜B一端，与形成的T带和C带相对应，室温干燥，4℃保存；

在塑料板上依次粘帖玻璃纤维素膜A、量子点标记甲型肝炎病毒单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸；

用试纸切刀切割成试纸，干燥后密封保存。

用所述的试纸检测甲型肝炎病毒，包括如下步骤：将样品点样在组装好的试纸上接近甲型肝炎病毒单克隆抗体的一端，反应5min后，在紫外分析仪中观察结果。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：由于在所制备的试纸中加入了核壳量子点，特别是采用了CdTe/ZnSe水溶性核壳量子点，将水溶性的量子点与特异性的通过共价偶联，然后利用双抗夹心原理结合量子点的荧光性质检测样品中是否含有目标物。在紫外灯的照射下，通过观察免疫层析试纸条上检测带和质控带的荧光线，判断检测结果。本发明将免疫反应的高特异性和量子点的荧光特性相结合，利用量子点多波长激发，高强度荧光发射，发射峰窄，峰形对称，发光稳定性好的荧光特性，建立了快速，特异，简便，灵敏的免疫层析检测方法。通过观察荧光信号达到了定量检测的目的。该方法的检测灵敏度比目前常用的一种快速检测方法-胶体金的检测灵敏度高约1000倍左右。

附图说明

图1为试纸制备的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。