[发明专利]果蝇肠道免疫相关基因的筛选方法

权利要求书

1.一种筛选果蝇肠道免疫相关基因的方法，其特征在于：

（1）从flybase网站上查找感兴趣的基因，并从国内外著名的果蝇保种中心购买所要筛选的基因突变体果蝇。

（2）对突变体果蝇喂食微生物，观察突变体果蝇的生存率、肠道对微生物的清除能力，及喂食微生物后突变体果蝇肠道的形态变化、肠道细胞的凋亡情况。

（3）对突变体果蝇喂食能够引起肠道炎症及肠道应激反应的化学试剂，观察突变体果蝇的生存率、肠道的形态变化、肠道细胞的凋亡情况。

（4）喂食微生物及化学试剂后检测与果蝇肠道免疫、肠道炎症及应激反应相关的信号通路的活化情况。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，基因突变体果蝇均购自GenExel果蝇保种中心，且均为P因子插入突变体。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述喂食的微生物为昆虫致病性真菌Beauveria bassiana及非致病性细菌Micrococcus luteus。

4.权利要求1或3所述的方法，其特征在于，喂食Beauveria bassiana的孢子浓度为OD₆₀₀=2，Micrococcus luteus浓度为OD₆₀₀=150，观察突变体果蝇的生存率。

5.权利要求1或3所述的方法，其特征在于，喂食连接Alexa Fluor488荧光的Micrococcus luteus和Beauveria bassiana的孢子2h后喂食5%蔗糖6h，观察突变体果蝇肠道对这两种微生物的清除能力。

6.权利要求1或3所述的方法，其特征在于，喂食OD₆₀₀值为150的Micrococcus luteus，72h后观察肠道的形态变化，用7-AAD染色后，观察肠道细胞的死亡情况。

7.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述喂食能够引起肠道炎症及肠道应激反应的化学试剂为过氧化物（H₂O₂）、高盐离子（NaCl）以及表面活性剂（SDS）。

8.权利要求1或7所述的方法，其特征在于,喂食H₂O₂的浓度为1%，SDS的浓度为0.5%，NaCl的浓度为0.4M，观察突变体果蝇的生存率。

9.权利要求1所述的方法，其特征在于，喂食0.5%的SDS，96h后观察突变体肠道的形态变化，144h后观察肠道细胞的死亡情况。

10.权利要求1所述的方法，其特征在于，给果蝇喂食微生物或化学试剂后，选取多个不同时间点分离果蝇肠道，并用real-time PCR方法检测肠道免疫相关信号通路靶基因的转录情况。