[发明专利]结直肠癌恶性程度及其转移的免疫组化诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤免疫诊断试剂盒，具体涉及用于结直肠癌免疫组化试剂盒。

背景技术

S100蛋白是由小分子量蛋白（10-14 kDa）组成的钙结合蛋白家族，因其在中性 pH 条件下能溶解于 100% 饱和度硫酸铵中而得名。研究发现，此类蛋白只在脊柱动物中表达，目前已发现23种S100 蛋白家族成员。S100A8蛋白是S100 蛋白家族的重要成员之一，具有S100 蛋白家族特征性的保守EF 手型结构和4-螺旋环形，通过与Ca²⁺、Zn²⁺及Cu²⁺等不同金属离子结合发生结构变异，暴露与靶蛋白的结合位点进而通过与相应的效应靶蛋白相互作用参与炎症反应、免疫反应及肿瘤发生发展等生物学效应。虽然国内外研究表明，S100A8在胃癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌中显著高表达，但对于S100A8蛋白与特定肿瘤发生发展的关系，以及其S100A8在特定肿瘤诊断治疗中的应用，尚缺少更深入的实验和研究。

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是消化道常见的恶性肿瘤，据2008年国际癌症机构（IARC）研究统计，世界范围内每年约有一百万人发生结直肠癌，全球结直肠癌死亡率占肿瘤总死亡率8%，肿瘤致死率排名第四，且我国结直肠癌病死率高达45.5%，而结直肠肿瘤的恶性程度及侵袭转移的发生与肿瘤致死密切相关。因此，寻找一种快速判断结直肠癌恶性程度和远处转移的检测方法至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速便捷地诊断结直肠癌恶性程度和远处转移的免疫组化检测试剂盒，用本发明的免疫组化试剂盒，检测结直肠病理组织表面S100A8抗原的表达，以此能快速准确地判断结直肠癌恶性程度及转移情况。

为达到上述发明目的，发明人提供一种诊断结直肠癌恶性程度和远处转移的免疫组化检测试剂盒，该试剂盒包含：内源性过氧化物酶阻断剂、非特异性结合位点阻断剂、一抗、二抗、酶、显色剂。所述的一抗为人源抗S100A8单克隆抗体或鼠源抗S100A8单克隆抗体，所述的二抗为生物素标记的羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG。

本发明中，常规各种用于免疫组化试验的内源性过氧化物酶阻断剂、非特异性结合位点阻断剂、酶、显色剂均可用于本发明试验盒，但作为最佳选择，本发明中所述的内源性过氧化物酶阻断剂优选3 wt%H₂O₂，所述的非特异性结合位点阻断剂优选为非免疫羊血清，所述酶优选链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶，所述显色剂优选DAB显色剂，包括：DAB缓冲液（20×），DAB底物（20×），DAB色原（20×）。

更进一步地，作为本发明试剂盒的优化，还在试剂盒中设置用于参照的比对色卡，以方便对待测样本的染色结果进行比对，或者设置对待测样本切片中染色细胞百分数进行自动计算的计数器，以便于对样本染色结果做快速分析。

 发明人通过研究发现：S100A8在结直肠癌中的表达水平明显高于正常结直肠组织，并且，S100A8蛋白的表达水平在不同分化程度结直肠癌组织中表达强度存在显著差别，高、中、低分化结直肠癌组织中，S100A8蛋白表达的强阳性率呈明显递增趋势，即分化程度越低，强阳性表达水平越高，分化程度越高，表达水平越低；同时，在转移结直肠癌组织中，S100A8蛋白阳性及强阳性表达水平明显高于非转移癌组织。因此，检测受试者结直肠组织表面S100A8的表达水平，可以作为结直肠癌的恶性程度、远处转移诊断的分子标志物。因此，发明人提供上述免疫组化试剂盒，利用该试剂盒，通过检测结直肠病理组织表面S100A8抗原的表达，能快速准确地判断结直肠癌恶性程度及转移情况，为结直肠癌的临床诊断提供帮助。

附图说明

图1：分析NCBI GEO DataSets系列GSE9348中探针202917_s_at所对应的S100A8在12例正常结直肠组织和70例结直肠癌组织的RNA表达结果图。

图2：免疫组化检测正常结直肠组织及高、中、低分化结直肠癌组织中S100A8蛋白的表达结果图， A-F图均为显微镜下放大200倍的组织结构图，其中：

A图：正常结直肠组织阴性对照（未加S100A8一抗）；

B图：结直肠癌组织阴性对照（未加S100A8一抗）；

C图：正常结直肠组织；

D图：高分化结直肠癌组织；

E图：中分化结直肠癌组织；

F图：低分化结直肠癌组织。