[发明专利]一种对虾白斑症病毒双抗体夹心ELISA检测试剂盒

权利要求书

1. 一种检测对虾白斑症病毒的单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞WSSV-3B7，保藏号为CCTCC NO: C201398，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2013年06月24日的杂交瘤细胞分泌的。

2.一种包含权利要求1所述单克隆抗体的对虾白斑症病毒双抗体夹心ELISA检测试剂盒。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于它包含兔抗WSSV多抗作为捕获抗体、鼠抗WSSV单抗WSSV-3B7作为检测抗体，以及包被捕获抗体的酶标板、封闭液、洗涤液、碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG抗体、底物显色液。

4.一种对虾白斑症病毒双抗体夹心ELISA检测方法，其特征在于它包括以下步骤：（1）加待检样品：取试剂盒中包被有捕获抗体的酶标板，向其中加入经过前处理的待检样品，每孔100 μL，每个样品3个重复，37 ℃孵育1 h；（2）检测抗体孵育：弃去板内液体，洗涤酶标板，每孔加入100 μL检测抗体，37 ℃孵育1 h；（3）酶标二抗孵育：弃去板内液体，洗涤酶标板，每孔加入100 μL碱性磷酸酶标记羊抗鼠IgG抗体，37 ℃孵育1 h；（4）显色与OD测定：弃去板内液体，洗涤酶标板，每孔加入200 μL底物显色液，37 ℃条件下孵育发色15 min，每孔加入50 μL 2 mol/L的NaOH溶液终止反应，用酶标仪测定OD₄₀₅值；（5）标准方程的建立：使用酶标仪测定已知浓度的白斑症病毒溶液，得到对应的OD₄₀₅-WSSV浓度对数值，拟合得出线性标准线性方程y=5.9625x+0.9209；（6）待测样品的测定：将测得的待测样品的OD₄₀₅值作为x值代入上述线性标准线性方程计算出的y值，即为WSSV浓度的对数值，进而计算出待测样品中WSSV的浓度。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于所述待检样品的前处理方法如下：取少量患病对虾组织，按每1 g组织加入2 mL 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液，冰浴研磨3~5 min，于4 ℃下4 000 rpm离心10 min，上清液在室温静置1 h后作为待检样品。